Текущее время: Вс июн 25, 2017 12:33 am

Часовой пояс: UTC + 2 часа





Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 68 ]  На страницу 1, 2, 3  След.
Автор Сообщение
 Заголовок сообщения: Интересные статьи
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 10:27 am 
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом


Теrri Маrie Веаusejour

Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как "стерильные технологии," "чистые помещения", "ламинарные боксы" и "агаровые питательные среды".
А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением.
Мужайтесь, вы не одиноки!
Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (МSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности - это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве.
Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию МЗЗР периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.

Цели и задачи
Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами - спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех.

Задачи у нас вот какие:

• Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше)
• Из основной культуры создать несколько ее образцов
• Избежать заражения культуры
• И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.
Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):
1. Стерильная культура на агаровой среде
2. Стерильная культура на зерне, известная также как "зерновой мицелий"
3. Плодоношение на пастеризованном субстрате
Пусть слово "стерильность", наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить "борьбу" за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.

Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры

Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур (Прим. ред.: Кроме того агар используется в юго-восточных кулинариях и производстве некоторых конфет и мармеладов). Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.
Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси - это хороший выбор.
Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator ("Грибовод"), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.

Материалы, необходимые для обоих методов:
• Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
• Алюминиевая фольга
• Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки - можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте (Прим. ред.: можно использовать обычные пробирки, желательно большого объема, с ватными пробками. Пробки изготовляются из плотноскатанной ваты и обтягиваются марлей. При стерилизации, чтобы пробки не отсыревали, их оборачивают плотной бумагой или фольгой).
• Небольшая воронка для заполнения пробирок
• Мерные чашки
• Скороварка
• Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком.
Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка - это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 - $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.
Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 - 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.

Картофельный агар. Метод №1

(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)
Необходимые материалы:
• 300 грамм картофеля
• 20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)
• 10 грамм декстрозы или другого сахара
• 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)
Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы - по вкусу :).
После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать.
Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).
Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.
Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть.
Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального.
Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела "скошенный" вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют "косым агаром").
По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.

Рис. 1 Это действительно просто! (Рисунки выполнены Т. Beausejour) Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture - стерильная ткань гриба, Inoculation in Grain - инокуляция зерна, Incubation of Spawn - рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate - перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate - плодоношение грибов на субстрате.


Вложения:
рис. 1.jpg
рис. 1.jpg [ 80.26 KIB | Просмотров: 3046 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 10:43 am 
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды) Необходимые материалы:
• 10 унций или 284 грамм картофеля
• 3/4 унции или 21.3 грамм агара
• 1/4 унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром

Шаг 1: Смешивание ингредиентов
1. Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
2 Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды.
3 Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
4 Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.

Шаг 2: Растворение агара
1. Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
2. Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара.
3 Оставьте скороварку для медленного остывания.

Шаг 3: Заливка агара в пробирки
1. С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки.
2. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.

Шаг 4: Стерилизация агара
1. Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм.
в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. 2 Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.

Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
1. Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков.
2 Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
3. После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.

Методики стерильной работы с грибной культурой

После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры. Необходимые материалы:
• Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
• Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички (Прим.ред.: Вместо спиртовки лучше использовать "факел", просто налейте немного спирта на крышку металлической банки из-под растворимого кофе и подожгите его).
• Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок
• Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
• Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант)
• Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
• Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами).
Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать "боевую" пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке.
Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробиркумежду средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).


Вложения:
рис.2.jpg
рис.2.jpg [ 30.14 KIB | Просмотров: 3045 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 10:49 am 
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой.
Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.

Рис. 3 Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube against the Heel of the Hand -переместите в это место путем постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -поместите сюда


Вложения:
рис.3.jpg
рис.3.jpg [ 16.02 KIB | Просмотров: 3044 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 11:00 am 
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения.
После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуите заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела.
После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре "дышать", но предотвратит
попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом.
Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13-21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям.

Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий

Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок
Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является "мастер-культурой" (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Тем не менее, вместо использования фрагмента грибной ткани, взятого из плодового тела гриба, можно взять небольшой кусочек агара, содержащего мицелий из пробирки с маточной культурой. Перенос производится с помощью скальпеля или другого подходящего приспособления, например, инокуляционнои петли, которую можно купить или изготовить самостоятельно из отрезка проволоки, прикрепленного к какой-нибудь ручке (См. рис. 4. Прим. ред.: Это инструмент микробиологов, для микологии лучше подходит не петля, а крючок или "коготь" на рабочем конце стальной проволоки).

Рис. 4 Простое приспособление Комментарий к тексту на рисунке: Inoculation Loop - инокуляционная петля


Вложения:
рис.4.jpg
рис.4.jpg [ 10.91 KIB | Просмотров: 3043 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 11:11 am 
Еще раз повторюсь, обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю после каждой произведенной инокуляцией и сократите до минимума время, в течение которого пробирка остается открытой. После небольшой тренировки такие переносы будут получаться быстро и с превосходными результатами.

Стерильный перенос на зерно для создания посадочного мицелия
Следующим шагом в процессе культивирования будет увеличение количества мицелия путем выращивания его на зерне, получение так называемого "зернового мицелия". Грибные культуры, выращенные на зерне, легко размножаются при перетряхивании зерна и, как будет видно дальше, путем переноса из одной емкости в другую. Например, одна бутылка зернового мицелия может быть использована для инокуляции многих десятков литров плодоносящего субстрата. Зерно достаточно дешево и всегда имеется в магазинах здорового питания или в магазинах для животных.
Зерно легко колонизируется многими сапрофитами, с число которых входят такие виды, как Рleurotus (Вешенка, устричный гриб) и Agaricus (шампиньон и его сородичи).
Вот две одинаково хорошо зарекомендовавшие себя методики. В первой используются бутылки объемом 0.33 или литровые из-под пива, воды или напитка и зерно пшеницы, которое можно заменить ржаным. Во второй методике используются стеклянные банки для консервирования и зерновой корм для птиц. Несмотря на то, что в обоих случаях возможны вариации с видами используемого зерна, изначально эти методики дают немного разные результаты. Попробуйте несколько вариантов и выберите для себя наилучший.
Основное преимущество бутылок состоит в том, что их горлышки имеют меньший размер и, соответственно, шансы на заражение также меньше. Это преимущество в дальнейшем может обернуться недостатком: через узкое горлышко гораздо труднее извлечь содержимое бутылки.
Если у вас есть (или вы приобретете позже) бокс, снабженный антибактериальным НЕРА-фильтром для работы в чистом ламинарном потоке воздуха ( это сведет проблему заражения к минимуму), то я рекомендую использовать банки, потому что с ними проще работать. Тем не менее, если вы умеете работать аккуратно, то можно достичь успеха при использовании любой технологии, даже без использования стерильного бокса. (См. рис. 5)

Рис. 5 Два способа разведения мицелия
Комментарий к тексту на рисунке:
Слева: Spawn Method #1 - Метод размножения #1, Aluminium Cover - алюминиевый колпачок, Cotton Plug - хлопчатобумажный тампон, Mycelial Tissue - мицелий.
Справа: Spawn Method #2 - Метод размножения #2, Microporous Filter -бактериальный фильтр, Aluminium Cover - алюминиевая крышка, Mycelial Tissue - мицелий.


Вложения:
рис.5.jpg
рис.5.jpg [ 36.51 KIB | Просмотров: 3042 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 11:37 am 
Материалы, необходимые для обеих методик:
• Скороварка достаточного размера, чтобы вместить бутылки или банки
• Алюминиевая фольга
• Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)

Приготовление зерна, метод №1
Необходимые материалы
• Чистая 0.33 или литровая бутылка из-под пива, воды или напитка.
• Хлопчатобумажный бинт или синтепон (аналогичный набивке в подушках)
• Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)
Рецепт для бутылки 0.33:
• 1/3 чашки пшеницы или другого зерна
• 1/4 чашки воды

Рецепт для литровой бутылки:
• 1 чашка пшеницы
• 2/3 чашки воды

Руководство по работе с зерном и бутылками
Есть одно важное замечание, касающееся приготовления зерна: объем зерна увеличивается примерно вдвое после его варки или стерилизации. Правило большого пальца звучит так: заполняйте контейнер сухим зерном только на одну треть. При использовании бутылок, воздухопроницаемая пробка может быть изготовлена из хлопчатобумажного бинта (продается в аптеках) или из синтепона (продается в магазинах тканей).

Приготовление/Стерилизация
Зерно может быть приготовлено/стерилизовано в один или два этапа. Процесс в два этапа дает очень однородный продукт, но если имеющееся время ограничено, то варка и стерилизация могут быть произведены одновременно.

Процесс в два этапа
После того, как бутылки заполнены зерном и водой, поместите их в скороварку и накройте листом алюминиевой фольги. Фольга предохраняет воздухопроницаемые пробки от увлажнения конденсатом Сварите зерно в скороварке под давлением 1 атм. в течение семи минут. Дайте скороварке остыть а потом, надев кухонные варежки, перетрясите горячие бутылки, чтобы влажные и сухие зерна перемешались. Поместите контейнеры обратно в скороварку и стерилизуйте при давлении 1 атм. в течение 45 минут. Время разогрева скороварки в эти 45 минут не входит. Затем дайте скороварке медленно остыть.
Извлеките бутылки и перетрясите еще раз, чтобы перемешать зерно. Накройте фильтрующие пробки бумагой, чтобы на них не попадала пыль. Это поможет избежать заражения. Хранить бутылки нужно в шкафу или коробке, в свободном от пыли месте. В связи с тем, что зерно с течением времени постепенно высыхает, не следует заготавливать бутылки слишком заранее.

Процесс в один этап
Порядок действий такой же как выше, но варка производится просто в течение 45 минут при давлении атм. После того, как скороварка уже остыла, но бутылки все еще горячие, извлеките бутылки с помощь кухонных варежек и перетрясите их, чтобы влажные зерна перемешались с относительно сухими.
Правильно приготовленное зерно выглядит разбухшим и легко перетряхивается с характерным "звонким", но мягким звуком. Переваренные зерна, приготовленные с избытком воды, зачастую лопаются. В результате, крахмалистое содержимое способствует слипанию зерен, делая перетряхивай затруднительным. Зерно, приготовленное с недостаточным количеством воды, будет твердым, сморщенным и непригодным для роста мицелия.

Приготовление зерна, метод №2
Необходимые материалы:
• Полулитровые или литровые банки для консервирования
• Микропористые фильтры, подходящие по размеру к горлышкам банок (из микологических комплектов или изготовленные самостоятельно)
• Алюминиевая фольга
• Сетчатые мешочки для процеживания краски (есть в хозяйственном или строительном магазине)

Приготовление зерна
Отмерьте одну банку зерна на каждые три банки будущего субстрата и засыпьте зерно в малярный мешочек, но не больше половины его объема. Если нужно, заполните больше мешочков, только не забывайте, что за один раз можно сварить только то количество мешочков, которое поместится в скороварке. Завяжите мешочек шнурком, поместите его в кастрюлю или на дно скороварки (крышку пока не закрывайте), добавьте воды, чтобы только-только покрыть зерно и варите в течение 30 минут. Затем перенесите мешочек в раковину и промойте холодной водой в течение нескольких минут. Промывка способствует удалению вываренного крахмала, так что зерно не будет слипаться.
Дайте воде стечь в течение нескольких минут. Пока вода стекает, вставьте фильтры в кольца, которые будут их фиксировать на горлышках банок . Фильтры можно приобрести у поставщиков (см. ссылки в конце статьи) или вырезать по размеру горлышка из подходящей материи, например из плотного и жесткого полиэстера (курточная ткань). Вместо фильтра можно попробовать использовать диск, который идет с фиксирующим кольцом, перевернув его для обеспечения некоторой циркуляции воздуха Однако, фильтрующие качества такого метода остаются под вопросом, а риск заражения заметно возрастает. Если вы собираетесь заниматься грибоводством в течение длительного времени, стоит потратить определенную сумму на приобретение многоразовых фильтров.

Приготовление/стерилизация
Развяжите мешочек и заполните зерном банки. Банки должны быть заполнены наполовину или на две трети. Установите на горлышки банок крышки с фильтрами, но не очень плотно. Скороварки обычно идут с сетками, которые не дают банкам касаться дна. Добавьте в скороварку воды, чтобы она почти доходила до банок, когда они стоят на сетке, (воды должно быть по крайней мере сантиметров пять).
Поставьте банки в скороварку. Внимательно изучите инструкции производителя скороварки, а особенно информацию, относящуюся к ее безопасной эксплуатации. Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. (121 град. Цельсия) и поддерживайте это давление в течение двух с половиной часов. Выключите газ и дайте скороварке остыть в течение 30 минут. Осторожно извлеките банки из скороварки, используя чистые кухонные варежки, если банки еще слишком горячие. Закройте крышки на банках плотнее и оберните их алюминиевой фольгой. Сильно встряхните банки, чтобы удостовериться, что зерно не слиплось и не сделалось комом. Хранить банки до использования нужно в чистом, свободном от пыли месте.

Добавки к зерну
Для некоторые сортов грибов кислотность субстрата, которая выражается в рН, может влиять на показатели роста. Кислотность может быть оптимизирована путем добавления 1 столовой ложки молотого известняка (СаСОз) к 4.5 литрам воды и использования в дальнейшем этой смеси в качестве добавки к зерну. Известняк можно купить в садово-огородном отделе (он иногда называется "сельскохозяйственный известняк"). Вид Лgnricus bisporous (шампиньон, или Портобелло) является хорошим примером того, когда рост мицелия улучшается после добавления к зерну известняка. Более полная информация по требованиям к субстрату для различных видов грибов имеется в специальных изданиях, например в книге "Грибовод" Пола Стэймета (Paul Stamet, "The Mushroom Cultivator").

Перенос агаровой культуры на зерно в бутылках или банках

Одной пробирки хватит для инокуляции нескольких банок или бутылок с зерном, потому что на каждую банку уходит только крошечный кусочек мицелия. Техника инокуляции, вообще говоря, должна быть стерильной, как в описано в предыдущем разделе. Еще раз повторюсь, все материалы и принадлежности должны быть расположены на рабочем месте до начала работы. Сперва потренируйтесь на пустых банках и пробирках, пока не почувствуете, что можете делать все быстро и удобно.
Для работы с бутылками или банками хорошо использовать специальную подставку, на которой бутылки или банки располагаются в горизонтальном положении, пока производятся переносы. Это освобождает руки для открывания и снятия крышек. Подставку можно без труда сделать из молочного тетрапака, вырезав в нем выемки подходящего размера.
После того, как вы сняли колпачок с пробирки или крышку с бутылки или банки, используйте инокуляционную петлю (рис. 4) для того, чтобы вырезать небольшой кусочек мицелия из агара. Поместите мицелий внутрь банки и закройте крышку на банке и колпачок на пробирке. Если нужно, постучите по банке, чтобы мицелий оказался на зерне.
Обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю в пламени после каждой инокуляции и не забывайте держать пробирку и банку в горизонтальном положении в течение всего процесса, чтобы исключить попадание на субстрат частиц из воздуха.
После того, как банки инокулированы, поставьте на них перманентным маркером дату или наклейте ярлычки из липкой бумаги. Можно также поставить на контейнере стрелочку, указывающую на место, куда был помещен мицелий, потому что при дальнейшем наблюдении порою трудно найти это место, пока мицелий не начал расти. После того, как начался рост мицелия на зерне, периодически встряхивайте контейнер, чтобы ускорить колонизацию и предотвратить слипание зерна в плотную массу. Мицелий вешенки или шампиньона хорошо растет при комнатной температуре. После окончательной колонизации культуры мицелий можно хранить в холодильнике, чтобы сохранить его жизнеспособность.

Шаг III: Основной субстрат и стимуляция плодоношения

Третья и заключительная фаза культивирования грибов заключается в том, чтобы еще больше размножить мицелий (но обычно не на зерне, а на другой среде) и обеспечить такие условия окружающей среды, при которых произойдет стимуляция плодоношения. Субстраты для плодоношения могут отличаться по составу в зависимости от вида выращиваемого гриба. В этой статье мы рассмотрим требования к субстрату и условиям, необходимым для плодоношения видаРleurofus (устричные грибы, вешенка).
Вешенки являются превосходным выбором для начинающего грибовода, потому что мицелий вешенки растет быстро, ведет себя агрессивно по отношению к нежелательным организмам и не требует создания каких-то особых условий для успешного плодоношения. Нужно отметить, что сорта вешенки отличаются по цвету. Среди имеющихся в продаже сортов имеются вешенки белого, коричневого, розового и желтого цветов.

Субстраты для плодоношения
Вешенка может плодоносить на различных материалах, таких как древесина твердых пород (чурки), солома, опилки, кукурузные кочерыжки, измельченные газеты и т.д. Избегайте использования опилок или стружек от древесины хвойных пород, таких как сосна, потому что они подавляют рост мицелия вешенки. Субстрат для выращивания вешенки можно купить в сельскохозяйственных и животноводческих магазинах. В продаже могут быть тюки соломы или древесные стружки для подстилки. Пилорамы, на которых пилят древесину твердых пород и деревообрабатывающие компании тоже являются хорошим источником сырья для приготовления субстрата. Проявите наблюдательность и смекалку.

Приготовление субстрата
Вешенка может быть выращена на пастеризованном субстрате, который проще в приготовлении и дешевле, чем стерильная среда. Целью пастеризации является выщелачивание растворимых компонентов, которые могут способствовать развитию конкурирующих грибков, а также уничтожение насекомых-паразитов. Простой способ приготовления пастеризованной рубленой соломы или аналогичного материала - это насыщение кипящей водой в течение 30 минут а затем отцеживание и охлаждение. Влажность субстрата считается подходящей, если при сжатии субстрата в руке вода только-только проступает в виде капелек между пальцами.
Для использовании больших количеств субстрата или деревянных чурок , на улице можно использовать 200-литровую бочку, разогревая ее подходящей газовой горелкой. Наполненную субстратом и водой бочку можно довести до кипения за 30-45 минут. Затем субстрат нужно отцедить (можно сделать сито из проволоки и поместить на дно бочки перед загрузкой субстрата). Альтернативный способ - наполнить наполовину субстратом малярные сеточки, завязать их и заполнить ими бочку на 1/2 или 3/4 объема, добавить води и вскипятить, как указано выше.

Количество плодоносящего субстрата и контейнеры
Плодоношение может происходить при любом количестве субстрата, но для начинающих грибоводов было бы правильным начать с небольших количеств, для того, чтобы отточить свою технику. Двухлитровый тетрапак из-под молока с помещенным внутрь полиэтиленовым пакетом - вот подходящий размер для первых экспериментов. Другой вариант - купить в хозяйственном магазине пластиковые рукава или пищевые контейнеры с крышками. Они недорогие, прочные, транспортабельные и через них хорошо видно процесс разрастания культуры.

Обогащение субстрата
Урожайность может быть повышена за счет добавок, богатых питательными веществами, таких как зерна кофе, целлюлозная мука, рисовые отруби и т.д. Тем не менее, добавки следует использовать с известной осторожностью, поскольку их применение увеличивает риск заражения. В большинстве случаев подобные материалы добавляют после первоначального зарастания культуры мицелием, т.е. после того, как субстрат полностью колонизирован и опасность заражения меньше. Попробуйте с помощью палочек для еды сделать в колонизированном мицелии небольшие туннели (сверху вниз) а затем засыпьте в них пастеризованную добавку (например с помощью воронки). Такой способ поможет мицелию быстро освоить добавку, не позволяя другим организмам сделать это быстрее.

Размножение посадочного мицелия
Чем больше зернового мицелия использовано для инокуляции субстрата, тем скорее он будет колонизирован, следовательно, вероятность заражения при этом меньше, а плодоношение начнется быстрее. В связи с тем, что пастеризованные культуры могут подвергнуться заражению плесенью и бактериями, для первого раза лучше явно перебрать с количеством мицелия для инокуляции. Неплохо будет, если на трехлитровый объем субстрата вы добавите чашку зернового мицелия.
Перед тем, как открыть бутылку или банку, хорошенько перетрясите зерно. Рассыпьте зерновой мицелий по поверхности субстрата или перемешайте чистыми руками субстрат и зерно на противне, а затем наполните полученной смесью пластиковый пакет или контейнер. Завяжите пакет свободным узлом или просто подверните открытую часть. Если на контейнере есть крышка, то через несколько дней надо будет проколоть в ней небольшие отверстия для притока свежего воздуха. Положите пакет или контейнер в место, свободное от пыли и может быть даже накройте сверху бумагой или пленкой, чтобы вместе с пылью не занести на субстрат заражение.
Большинство штаммов вешенки, особенно те, которые используются на промышленном уровне, растут быстро при температуре от 18 до 24 град. Цельсия и не требуют понижения температуры для инициации плодоношения. В течение разрастания мицелия культура должна содержаться в среде с повышенной влажностью и минимальной циркуляцией воздуха. Мицелий вешенки может выжить при довольно высоком уровне содержания углекислого газа (С02). Субстрат в двухлитровом тетрапаке из-под молока при температуре 21-24 град. Цельсия должен полностью зарасти мицелием примерно за три недели.

Плодоношение
В обычных условиях культура не будет плодоносить до тех пор, пока субстрат не колонизирован полностью. Небольшие образования или коралловидные выросты на поверхности говорят о том, что культура начала плодоносить. Несмотря на то, что понижение температуры субстрата для плодоношения обычно не требуется, небольшое количество рассеянного света считается важным фактором.
Для образования плодовых тел нормальной формы требуется больше свежего воздуха, чем при росте мицелия, но обеспечение высокой влажности также является необходимым. Чтобы выполнить это условие, культуру обычно помещают в пластиковый пакет с отверстиями для аэрации или в коробку (террариум), в которой имеется лоток с увлажненным гравием. В случае использования контейнера с крышкой, после появления грибных зародышей, т.е. когда начинают формироваться крошечные скопления, напоминающие миниатюрные грибы, крышка может быть снята, а для поддержания влажности потребуются упомянутые выше пакеты с отверстиями или террариум.
Для того, чтобы из грибного зародыша вырос полноценный гриб вешенки, может потребоваться неделя в зависимости от температуры и влажности. Если края шляпки гриба начали заворачиваться кверху, это означает, что гриб достиг наибольшей зрелости. К этому времени нужно решить, что делать с грибом дальше - использовать его для дальнейшего разведения или съесть за ужином.(См. рис. 6)


Вложения:
рис.6.jpg
рис.6.jpg [ 14.03 KIB | Просмотров: 3041 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 11:41 am 
Что делать дальше

После того, как вы освоите рассмотренные методики и достигните успехов в выращивании легко культивируемых сортов, таких как вешенка, вам, возможно, захочется попробовать свои силы на других видах. Может быть, ваши домочадцы даже попросят сделать дома уголок, где были бы собраны различные плодоносящие сорта, разрастающиеся культуры и прочие атрибуты грибоводства. Может быть, вы продолжите наступление на контаминацию и приобретете ламинарный бокс или даже оборудуете лабораторию в неиспользуемой комнате или ванной. А может быть, вы захотите исследовать возможность натурализации некоторых видов в саду или где-нибудь еще на улице.
Первым делом, если в вашем районе проводятся обучение и практические занятия по культивированию, я очень рекомендую записаться на них. Чем больше вы будете открыты к изучению новых техник и чем больше будете общаться с грибоводами на различных уровнях, тем больше у вас будет успехов и достижений. Ваше местное микологическое общество может предлагать курсы. Возможно, даже существует комитет по культивированию или по крайней мере список лиц, заинтересованных в культивировании, с которыми вы могли бы обмениваться идеями и помогать друг другу полезной информацией и советами.
Если в вашей местности не проводятся занятия, попробуйте связаться с опытными микологами, которые вероятно с радостью взялись бы за обучение, если бы аудитория проявляла соответствующий интерес. Или организуйте комитет по культивированию самостоятельно!
Сейчас, если вы еще этого не сделали, я рекомендую вам приобрести какое-нибудь хорошее руководство по грибоводству, например "Грибовод" (The Mushroom Cultivator), авторы Paul Stamets and J.S. Chilton. Вы можете также заказать некоторые грибные культуры по почте, например у таких поставщиков, как Fungi Perfecti или Western Biologicals и эти культуры будут отосланы к вам вместе с соответствующими инструкциями. Без сомнения, когда вы хорошо освоите рассмотренные техники культивирования, вы можете начать собственные эксперименты с видами, которые можно найти в своей местности или в магазине, размножая их вегетативным путем или даже освоив продвинутую методику работы со спорами.
Познайте волнующее переживание того, как крошечные зародыши превращаются в восхитительные зрелые грибы, выращенные из культуры, созданной собственными руками, и тогда что-то решительно изменится в вас. Вот здесь-то и начинается настоящее путешествие в мир грибов!

Источник Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", февраль, 2007


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 12:03 pm 
Да, статья в общем неплохая, сам когдато читал ее...
но только вопрос - а зачем статьи постить в форум, есть же для этого раздел "библиотека". Мне кажется туда -самое то!!!


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт май 25, 2007 5:48 pm 
Не в сети
Site Admin
Аватар пользователя

Зарегистрирован: Пт дек 22, 2006 12:22 pm
Сообщений: 2655
Страна: Украина
Город: Херсон
Телефон: +380503185807
Баллы репутации: 26
Лорчик согласилась следить за форумом. Выложить статью на сайте может Админ(создатель сайта), или я. Но мы оба несколько загружены. Поэтому основную работу делает Лорчик, а потом по отзывам пользователей можно решить, что заносить в библиотеку, а что нет. Кстати это касается всех пользователей. Если есть чем поделиться с миром - бросайте сюда, а со временем мы перенесем лучшее на сайт.


Вернуться наверх
 Профиль Отправить e-mail  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Вс май 27, 2007 7:08 pm 
Выращивание грибов

Лесные грибы можно успешно искусственно разводить (высевать) спорами. Есть несколько способов посева грибов. Например, можно старые, перезревшие шляпки грибов положить на новом месте под деревьями и прикрыть их сверху мхом или опавшими листьями. Чтобы увеличить вероятность всходов грибов, нужно время от времени у влажнеть лесную подстилку в том месте, где находятся шляпки грибов.
Несколько усовершенствованный способ посадки белых грибов: шляпки (зрелые) срезались, переворачивались нижней стороной вверх и доставлялись к месту посадки, где их разрезали на небольшие кусочки и подсушивали на солнце.
В месте посадки деревянной лопаточкой приподнимали верхний слой дернины, куда клали посадочный материал, после чего дернина слегка уплотнялась. Урожай грибов — минимум через два года. А можно просто шляпку созревшего гриба положить на лист чистой бумаги, через сутки на бумагу высыплются споры гриба, которыми можно делать посев.
Грибоводы-энтузиасты предложили ешё один способ: шляпки созревших грибов помешаются в сосуд с дождевой водой и выдерживаются там около суток. Затем этим грибным месивом, содержащим миллиарды спор, поливают тот участок леса, на котором раньше не росли грибы.
Таким способом грибовод-любитель М. И.Лаврентьев выращивал у себя белые грибы на плантации плошадью 12 м2, где он собирал урожаи по 50-60 первосортных белых грибов с одного квадратного метра. Правда, участок под посев он специально подготавливал: клал свежий конский навоз слоем 12—15 см, затем сверху смесь, состоящую из 4 частей дёрна, 3 частей прелых листьев, 2 частей гнилого дерева и 1 части глины.
Этими приёмами грибы можно выращивать как у себя на огороде, так и в лесу.
Белые грибы можно разводитьешё и так. Во второй половине августа подыскиваются крупные белые не червивые грибы, у которых низ шляпки был зелёным (они в это время встречаются чаше, чем мелкие). Затем подбирается хорошая многоствольная ("двоешка" или "троёшка") берёза 30-40-летнего возраста, растущая или на подстилке, образовавшейся из гниющей хвои, листьев и веточек, опавших с деревьев. или же в местах, где имелась мелкая трава (белоус). (При наличии высокой травы или осоки, а также в низинах, где долго стоит вешняя вода, заниматься разведением белых грибов не рекомендуется).
Сделав под берёзой три-четыре небольшие ямки глубиной 2-3 см, расположенные по кругу от ствола на расстоянии около 1 м, вы закладываете в них шепотку зелёной грибной массы, которую потом заделываете землёй. Вся эта нехитрая операция проводится по возможности в сырую погоду, но без устойчивых дождей и засух.
На третьем году, в период, когда поспевает малина в городских садах, в течение месяца через каждые 2-3 дня грибник наблюдает за посевами.
Учёные открыли, что грибницы многих грибов связаны с корнями деревьев, грибные нити проходят под кожицу корней. Оказывается, что корни деревьев из грибницы высасывают воду с минеральными веществами, а грибница из корней сахар.
Нити гриба как бы заменяют корням корневые волоски. Грибница столь необходима для некоторых растений, например, орхидей, что без неё они не развиваются. Корни вереска, черники, брусники соединены с грибницами. Такие деревья, как дуб, бук, без грибов плохо растут. Соединение гриба и корня дерева носит название микоризы и грибокорня.
При посадке дуба или жёлудя положите в лунку почвы с грибницей. Опыты посева спор грибов на грядах во многих случаях были безрезультатны. Грибы без деревьев тоже не могут расти, за исключением шампиньонов, вёшенок, сморчков и навозников.
Собирая грибы, замечайте, с какими деревьями они дружат.
Удачи вам!


Источник А. Сапронов "Сотворим с любовью, или Как обустроить своё поместье ". - Орел,2006.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 7:58 am 
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ
Стаметс П., иллюст. Аберта и др.
(три главы из книги, с сокращениями)

ГЛАВА 1. ЗНАКОМСТВО С КУЛЬТУРОЙ ГРИБОВ

ОБЗОР МЕТОДОВ РАЗВЕДЕНИЯ ГРИБОВ
Методы разведения грибов, независимо от вида, в основном схожи. Несмотря на то, что два вида могут1 отличаться по требованиям к температурным условиям, предпочтительному уровню кислотности среды или типу субстрата, шаги ведущие к плодоношению в сущности одни и те же. Заключаются они в следующем:
1. Приготовление и разлив агара по чашкам Петри.
2. Проращивание спор и выделение чистого грибного мицелия.
3. Увеличение массы мицелия на агаровом носителе.
4. Приготовление зерна.
5. Инокуляция зерна чистым мицелием с агара.
6. Инкубация грибницы на зерне.
7. а) перенос зерновой грибницы в лотки,
или б) инокуляция зерновой грибницей бедного субстрата.
8. Гобтировка (кейсинг) — нанесение увлажнённого покровного слоя из смеси торфа и других материалов (не для всех видов — прим.ред).
9. Плодоношение — снижение температуры, повышение влажности до 95%, увеличение циркуляции воздуха, снижение уровня углекислого газа и/или
10. Сбор урожая — поддержание температуры, снижение влажности до 85—92%, поддержание циркуляции воздуха, углекислого газа и/или уровня освещённости.
Многие виды могут дать небольшие урожаи прямо на зерне с покровным слоем. Но культиватор может пойти дальше ещё на один шаг и инокулировать зерном компост, солому или дерево. В любом случае для плодоношения грибам необходимы условия с высоким и легко контролируемым уровнем влажности. Без правильной влажности грибы расти не будут.
В последующих главах будут рассмотрены стандартные методы проращивания спор, а затем и способы выращивания мицелия на агаре, производство грибницы на зерне и/или отрубях, приготовление компостных и некомпостных субстратов, инкубация грибницы, гобтировка (кейсинг) и образование примордий. После последнего шага методы для плодоношения различных видов расходятся, и приемы присущие каждому грибу излагаются отдельно. Список обычно встречающихся проблем поможет культиватору определить и преодолеть встречающиеся затруднения. Затем следует исчерпывающий раэбор инфекций и вредителей грибной культуры и глава, посвященная генетическим особенностям грибов. В целом книга представляет собой систему знаний объединяющую опыт, накопленный грибоводами всего мира, используя который вполне реально вырастить грибы дома.

ГРИБЫ И ГРИБНАЯ КУЛЬТУРА
Тем, кто сталкивается с грибами впервые, они обычно внушают благоговейный трепет. Они иные. Непохожие ни на растения, ни на животных грибы обладают исключительно собственной фактурой, наружностью и манерой развития. Высшие грибы представляют малую ветвь эволюции царства грибов эумицетов известную как «мясистый гриб». В сущности, грибы это лишённые хлорофилла организмы, которые эволюционировали из водорослей. Основная роль грибов в экосистеме это разложение - звено в цепочке микробов, которые разрушают и перерабатывают мёртвую органическую массу. И хотя известны десятки тысяч грибов, высшие грибы составляют только малую долю насчитывающую несколько тысяч видов.
Независимо от вида, несколько шагов являются универсальными в культивации всех грибов. Не удивительно, что они в точности повторяют жизненный цикл грибов. Задача культиватора здесь состоит в том, чтобы изолировать требуемый вид от агрессивных соперников природного мира и поместить его в подготовленную среду, которая даст выращиваемому грибу явные преимущества над конкурирующими организмами. Три главных шага в выращивании грибов соответствуют трём фазам в их жизненном цикле:
1. Сбор спор, проращивание спор и изоляция мицелия; или клонирование ткани гриба.
2. Приготовление инокуляционного материала путём наращивания массы мицелия на обогащенном питательном носителе на основе агара и затем на зерне. Высаживание зерновой грибницы в компостные и некомпостные субстраты или использование непосредственно зерна как субстрата для плодоношения.
3. Создание условий для появления и развития плодовых тел (собственно грибов).
Понимание основ жизненного цикла гриба значительно упрощает изучение базовых методов культивации.

Плодовые тела это цветы грибного растения - мицелия. Мицелий пронизывает землю обширными сетями соединённых между собой клеток и живёт практически вечно. Скрытый от глаз мицелий производит плодовые тела, которые мы и называем грибами, только в оптимальных условиях включающих в себя температуру, влажность и наличие питательных веществ. В большинстве случаев у мицелия есть практически только одна возможность обеспечить выживание вида: выбросить чудовищное количество спор.
В масштабе жизненного цикла грибного растения плодовое тело появляется лишь на мгновение. Сети мицелия могут находиться в состоянии спячки месяцами, а иногда и годами и произвести единственную волну грибов. В течение этих нескольких недель плодоношения мицелий переходит в состояние бешеного роста, аккумулируя питательные вещества и формируя уплотнения в виде маленьких шариков называемых примордиями, которые со временем увеличатся и образуют плодовые тела грибов. Первыми из тканей развиваются гимениальные пластинки на нижней части шляпки, проявляясь сначала как складки, превращаются затем в прямые гребни и в конечном счёте вытягиваются образуя плоские вертикальные пластинки. Эти симметричные рационально расположенные пластинки покрыты клетками производящими споры - базидиями.
С конструктивной точки зрения гриб является эффективным репродуктивным телом. Его шляпка выступает куполообразным щитом, защищающим расположенные под ним гимениальные пластинки от разрушающего воздействия дождя, ветра и солнца. Многие виды грибов обладают так называемой частичной вуалью защищающей пластинки, растягиваясь от шляпки и окаймляя ножку. Споры начинают сыпаться как раз незадолго до разрыва вуали. После отсоединения частичной вуали спороношение продолжается с нарастающей скоростью. Шляпка гриба опирается на подобную колонне ножку, которая поднимает гимениальные пластинки над землёй, где даже малейшие потоки воздуха с лёгкостью уносят споры.

Совершенно очевидно, что каждая часть плодового тела гриба предназначена, для того чтобы дать спорам наилучшие возможности для созревания и распространения во внешней среде, условия которой зачастую оказываются суровыми и резко изменяющимися.
По мере созревания гриба продуцирование спор замедляется, прекращаясь в итоге вовсе. Это последние часы жизни плодового тела. Вскоре в процесс вступают бактериальное разложение и низшие грибы, которые быстро превращают некогда величественный гриб в комочек склизкой и зловонной массы, стекающей в землю из которой она и произошла.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 8:09 am 
ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ ГРИБА

Культивация грибов это одна из лучших возможностей для наблюдения Жизненного Цикла Гриба во всей его полноте. Жизненный цикл начинается со споры, которая порождает первичный мицелий. Вторичный появляется при скрещивании клеток мицелия произошедших от двух разных спор. Этот мицелий продолжает развиваться вегетативно. Когда вегетативный мицелий созреет, его клетки будут способны на феноменально быстрый уровень деления, на пике которого он возводит плодовые тела грибов. Это последнее функциональное изменение в результате которого он становится третичным мицелием. Эти три типа мицелия представляют собой три последовательные фазы жизненного цикла гриба.
Споры большинства грибов генетически гаплоидны (1N) и одноядерны. Это значит что каждая спора содержит в себе одно ядро и половину набора хромосом своего вида. Таким образом, у споры есть «пол» в том смысле что для созревания до мицелия способного к произведению потомства ей необходима спора противоположного типа. Сразу после выбрасывания споры представляют собой полностью готовые к прорастанию объёмные «влажные» клетки. Но вскоре начинается их обезвоживание и, высыхая стенки клетки, свёртываются к центру. В таком виде они смогут находится в состоянии покоя, пережидая сухие сезоны или сильные засухи. Когда погодные условия смягчатся и предоставят достаточный уровень влажности, споры снова напитаются влагой и вернутся к прежнему объёму. Только в этом случае возможно прорастание спор.
В пределах одного вида структура и форма спор в некоторой степени схожи. Однако если рассматривать споры разных видов то можно заметить значительные отличия. Некоторые гладкие в и имеют форму лимона (род Copelandia, к примеру); многие эллиптические (как у рода Psilocybe); тогда как другие обладают неправильной формой и сложной структурой поверхности (Lactarius или Entoloma). Верхушечные зародышевые поры присутствуют у спор многих грибов и особенно у псилоцибиновых видов.
Зародышевая пора это округлое углубление на одном конце споры из которого выпускается гаплоидная ниточка мицелия, называемая гифом. Гиф продолжает расти и, разветвляясь, образует мицелиальную сеть. При встрече двух генетически взаимодополняющих гифовых сетей в момент соприкосновения стенки клеток входящих в контакт растворяются, и происходит обмен цитоплазматическим и генетическим материалом. Эротично это или нет, но это «грибной секс». Весь мицелий появляющийся впредь будет двухъядерным и дикариотическим. Это означает, что в каждой клетке будет содержаться два ядра и полный набор хромосом. За несколькими исключениями, только полностью зрелый (дикариотический) мицелий способен к производству плодовых тел. Обычно дикариотический мицелий быстрее колонизирует субстрат и в принципе более сильный, чем монокариотический. Плодоношение уже принципиально возможно, как только мицелий вступает в дикариофазу. У Psilocybe cubensis период между прорастанием спор и появлением зачатков плодовых тел может занять всего две недели; у некоторых видов Panaeolus это может произойти уже через неделю. У большинства грибов, тем не менее, на это уходит несколько недель или месяцев.
Культиваторы, занимающиеся выведением новых штаммов, путём скрещивания выделенных односпоровых культур используют как признак для определения Зрелости (перехода в дикариофазу) мицелия наличие так называемых спаечных соединений. Спаечные соединения это микроскопические мосты, объединяющие две клетки, и встречаются они только в дикариотическом мицелии. Спайки можно легко увидеть даже с помощью слабого микроскопа с увеличением Х100-400. Не все виды образуют спаечные соединения. (Agaricus brunnescens не образуют, зато почти все виды Psilocybe и Panaeolus образуют). И, напротив, у мицелия полученного из гаплоидных спор спайки отсутствуют. Эта характерная особенность является бесценным инструментом для исследователя, выводящего новые штаммы. (За дополнительной информацией о стратегиях селекции см. Главу XV.)
Две сети мицелия, растущие вместе, могут обменяться генетической информацией и образовать новый штамм. Это случается при объединении двух гифальных систем и называется анастомоз. А если пересекаются две несовместимых колонии мицелия, то зачастую в месте их встречи образуется участок подавленного роста. На агаре подобный участок несовместимости будет виден невооружённым взглядом.
Когда мицелий начинает плодоносить, в его метаболизме происходит несколько радикальных перемен. До этого момента он развивался вегетативно. В вегетативной стадии гифальные клетки накапливают питательные вещества. Удивительно, что количество ядер в каждой клетке постепенно увеличивается и иногда даже достигает десяти в момент перед началом образования примордий. Непосредственно перед формированием плодовых тел эти ядра передаются через стенки вновь образующимся клеткам, и их количество усредняется до двух на клетку. По-видимому, такое увеличение количества ядер является необходимым условием для плодоношения у многих видов грибов.
По мере формирования гимениальных пластинок появляется всё больше базидиальных клеток, проявляясь поначалу маленькими пузырьками напоминающими булыжную мостовую. Базидия - это основная цель репродуктивной фазы жизненного цикла гриба. Тем не менее, баэидии не созревают все сразу. К примеру, у вида Panaeolus базидиальные клетки появляются очагами, придавая поверхности пластинок пятнистый вид. Клетки, из которых образуется базидия, обычно двухъядерные, и т.к. каждое ядро содержит одинарный набор непарных хромосом (1N), то клетка является дикариотической. И состав новых базидиальных клеток сходный. В определённый момент времени два ядра базидии начинают движение навстречу друг другу и объединяются в одно целое диплоидное (2N) ядро. Это превращение известно как кариогамия. Вскоре после этого диплоидное ядро претерпевает мейоз в результате, которого обычно рождаются четыре гаплоидных дочерних клетки.
На поверхности базидии возникают стеригмы — выступы похожие на щупальца, по которым движутся эти ядра. У большинства видов на кончиках этих выступов образуются четыре споры. Споры продолжают развиваться до тех пор, пока некое усилие не вытолкнет их в пространство. Сам механизм освобождения споры пока не объяснён учёными. Но наиболее распространённая в микологическом сообществе модель основывается на предпосылке, что это происходит из-за пузырька газа образующегося в месте соединения споры и стеригмы. Пузырёк газа надувается и взрывается «отстреливая» спору в полость между пластинками, откуда её уносят воздушные потоки. Обычно подобным образом освобождаются и другие споры. Спороношение завершает жизненный цикл гриба.
Не у всех видов грибов базидии производят четыре гаплоидных споры. Agaricus brunnescens (= Agaricus bisporus), обычный шампиньон, обладает базидиями с двумя диплоидными (2N) спорами. Это означает, что мицелии, полученный из одной такой споры уже полностью готов к плодоношению. Agaricus brunnescens - это только один пример диплоидного биполярного вида. У некоторых Copelandian Panaeoli (сильно синеющие виды рода Panaeolus) две споры и те же условия созревания, что и у Agaricus brunnescens. У других видов грибов базидии только с тремя спорами; у некоторых с четырьмя; а у несколько видов, таких как лисичка обыкновенная, на каждую базидию приходится восемь спор!
Осведомлённость начинающего грибовода о жизненном цикле значительно упростит первые попытки выращивания грибов. Как только будет достигнуто понимание сути грибной культуры и жизненного процесса этих организмов, культиватор сможет перейти к более сложным и интересным темам, таким как генетика и селекция штаммов. Такой всесторонний подход способствует углублению понимания вопроса и закладывает фундамент для развития инновационного подхода к разведению грибов.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 8:50 am 
ГЛАВА 2. СТЕРИЛЬНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ И РАБОТА С АГАРОМ
(см. также статью «Выращивание грибов. Советы начинающим.» во втором номере журнала «Домашняя лаборатория» за 2007 г. - прим.ред.)
Воздух которым мы дышим подобен живому океану, кишащему микроскопическими организмами, он колышется приливами и отливами от малейшего дуновения ветерка. Плесени, бактерии, вирусы и растения используют атмосферу для распространения своего потомства в новые ареалы обитания. И если не предпринять определенные меры предосторожности, то эти микрочастицы могут сделать поддержание стерильности технологии затруднительным, однако если вам удастся пресечь или сильно сократить движение этих организмов в воздухе, то в успехе стерильной технологии можно быть практически уверенным.
Существует пять основных источников заражения при работе с грибной культурой:
1. Непосредственно окружающая среда (воздух);
2. Субстрат (носитель культуры);
3. Инвентарь для культивации;
4. Сам культиватор (грибовод) и его или её одежда;
5. Споры грибов или мицелий.
Грибы, как и вообще все живые организмы постоянно конкурируют друг с другом за доступные питательные вещества. Создавая стерильные условия, вы просто даёте грибной культуре значительные преимущества перед несметным множеством других конкурентов. Пред тем как начать работу непосредственно с
культурой, первым шагом будет изготовление камеры для инокуляции или оборудование стерильной лаборатории.

ПРОЕКТИРОВАНИЕ И ОБУСТРОЙСТВО СТЕРИЛЬНОЙ ЛАБОРАТОРИИ

Большинство грибоводов терпят неудачу в своих начинаниях только из-за того, что не удосуживаются оборудовать место для стерильной работы. Хотя всё что может для этого потребоваться это полдня работы по переоборудованию стенного шкафа или кладовки в приемлемую лабораторию для инокуляций.
Начните с того, что уберите все коврики, шторки и прочие тканно-вязаные изделия в которых скрывается большое количество пыли и спор. Тщательно вымойте полы, стены и потолки с мягким дезинфектантом. Если вы покрасите помещение глянцевой белой эмалью, это упростит уборку в будущем. Закройте все окна и другие источники потенциальных сквозняков листовым пластиком. Либо с внешней, либо с внутренней стороны сконструируйте тамбур, который будет служить защитным шлюзом. Такая система будет выполнять роль защитного буфера между внешней средой и лабораторией. Тамбур следует организовать таким образом чтобы одна дверь могла бы оставаться закрытой, когда открывается другая дверь. Укомплектуйте лабораторию следующими предметами:
1. стул и устойчивый стол с гладкой поверхностью;
2. пропановая горелка, спиртовка или бутановая зажигалка (рекомендуем спиртовый факел, немного спирта налитого на крышку жестяной кофейной банки - прим.ред.);
3. чётко помеченный пульверизатор с 10% раствором гидрохлорида натрия (белизны, отбеливателя);
4. стерильные чашки Петри и пробирки;
5. самоклекщиеся листочки (или лейкопластырь), блокнот, ручка и нестираемый маркер;
6. нож для агара (скальпель) и инокуляционная петля (рекомендуем жесткий крючок - прим.ред.).
Все эти предметы должны всегда оставаться в лаборатории. Если что-то из этого было вынесено, перед возвращением убедитесь в абсолютной чистоте предмета.
Поддерживать в лаборатории условия близкие к стерильным можно простой тщательной уборкой, с частотой зависящей от частоты использования помещения. Степень тщательности будет зависеть от насыщенности воздуха спорами в вашем конкретном случае. В зимний период объём свободно перемещающихся спор радикально снижается, тогда как весной и летом можно заметить очевидный рост этого объёма. Следовательно, в эти периоды пикового роста количества контаминантов потребуется большая тщательность в уборке. Ещё более важно выносить из лаборатории все заражённые банки и чашки Петри способом, не представляющим угрозы для стерильности лаборатории.
Завершив обустройство лаборатории необходимо строго и неколебимо блюсти в ней жёсткую гигиену. Помещение следует мыть с дезинфектантом, полы со шваброй и напоследок распылять 10% раствор белизны из пульверизатора. После распыления в лабораторию нельзя входить в течение 15 минут, пока не осядут и напоследок распылять 10% раствор белизны из пульверизатора. После распыления в лабораторию нельзя входить в течение 15 минут, пока не осядут все взвешенные в воздухе частицы. Вы ДОЛЖНЫ проводить весь комплекс гигиенических процедур перед каждой инокуляцией. Запомните, как правило: заражение проще предупредить, чем уничтожить после появления.
Стерилизацию помещения необходимо проводить в течении 30-60 минут с помощью специальной бактерицидной лампы (продается в магазинах мед. оборудования и в специализированных магазинах по продаже осветительного оборудования, цены колеблются в пределах 300-600 рублей). Или с помощью лампы ДРЛ с удаленной внешней колбой, являющейся эквивалентом бактерицидной ртутной лампы высокого давления.
Такую лампу можно изготовить самому. Для этого необходимо собрать обычную установку для лампы ДРЛ (дроссель + патрон + лампа), а у самой лампы, аккуратно отбить защитную стеклянную колбу.


Вложения:
лампа.jpg
лампа.jpg [ 16.42 KIB | Просмотров: 3009 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 8:59 am 
Прежде чем продолжать, необходимо напомнить об осторожности. Стерильная работа требует концентрации, внимания к деталям и твёрдости руки. Работайте в пределах разумных промежутков времени, а не до полного изнеможения. Никогда не оставляйте без присмотра спиртовку или бутановую горелку и всегда помните о том что в замкнутом пространстве очень быстро заканчивается запас кислорода.
Некоторые грибоводы выводят войну с контаминантами за пределы разумного и иногда даже во вред собственному здоровью. Начинают «бойню» в лаборатории, накачивая её токсичными фунгицидами и бактерицидами, подвергая себя воздействию чрезвычайно опасных химических веществ. Вот был случай, когда лаборант вошёл в помещение, основательно накачав его гермицидом на основе фенола (карболовой кислоты). Из-за высокой концентрации яда он потерял чувство опасности и через несколько минут испытал сильное затруднение дыхания, онемение конечностей и конвульсии. Эти симптомы продержались несколько часов, и он полностью не восстановился даже через несколько дней. А вот ещё был случай, один человек установил в рабочем главбоксе (см. ниже -прим.ред.) коротковолновую ультрафиолетовую (кварцевую) лампу и проводил инокуляции голыми руками в течение месяца даже не подозревая об опасности. Источник света такого типа может вызвать рак кожи после продолжительного воздействия. Существуют альтернативные способы и средства, не причиняющие или Причиняющие незначительный вред здоровью и позволяющие бороться с контаминантами также, а иногда и более эффективно.
Если, несмотря на все ваши сверхусилия сохраняется высокий уровень контаминации, есть несколько дополнительных способов повышения стерильности. Первый, самый простой и недорогой, использует коллоидный раствор лёгкого масла распыляемый в воздухе лаборатории; второй включает в себя изготовление камеры с неподвижным воздухом, т.н. главбокс (glovebox - ящик с перчатками); а третий относительно дорог, т.к. требует использования высокоэффективных микронных фильтров.
1 - При распылении стерильного масла создаётся облако крайне вязких, маленьких капель. По мере оседания оно связывает все находящиеся в воздухе частицы. В этом способе используется триэтиленгликоль, испаряемый с поверхости подогреваемого тампона. Мелкодисперсный и более летучий, чем минеральное масло, триэтиленгликоль не оставляет сколько-нибудь заметной масляной плёнки. Использование триэтиленгликоля не отменяет стандартные меры по поддержанию гигиены.
2 - Главбокс - это воздухонепроницаемая камера, которая предоставляет условия для создания стерильной среды, в которой и проводится работа с культурами. Простейшая конструкция представляет собой ящик из фанеры, со смотровым окошком. В отверстиях для рук закрепляются перчатки, в которые вставляются руки. Иногда вместо перчаток передняя часть ящика прикрываются сменной хлопковой тканью, которую следует периодически стерилизовать. Главное преимущество главбокса заключается в том, что он, являясь уменьшенным в масштабе и недорогим подобием лабораторной комнаты, предоставляет удобный для чистки объём, в котором нет или почти нет движения воздуха и можно спокойно работать со стерильными культурами.


Вложения:
главбокс.jpg
главбокс.jpg [ 16.12 KIB | Просмотров: 3008 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 9:16 am 
я в таком боксе уже 3 года работаю, более-менее можно работать но с небольшими объемами....


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 9:20 am 
3 — Современные лаборатории решают проблему инфекциии переносимой по воздуху установкой высокоэффективных воздушных фильтров частиц (high efficiency particulate air (HEPA) filter). Эти фильтры задерживают все частицы диаметр которых превышает 0,1-0,3 микрона, т.е. меньше любых спор грибов и практически всех бактерий (суть там довольно проста, воздух продувается через наэлектризованную высоким напряжением многослойную пластиковую сетку или фильтр и вся пыль прилипает к ней - прим.ред. ). НЕРА-фильтры встраиваются в т.н. ламинарные шкафы. В некоторых стерильных лабораториях из НЕРА-фильтров набирается целиком герметичная стена или потолок и через них подаётся внешний воздух. В результате внутри лаборатории создаётся позитивное давление, которое не даёт проникнуть нестерильному воздуху. Устройство и типы ламинарных шкафов подробно обсуждаются в приложении IV.
У некоторых культиваторов практически не возникает проблем, при том что они работают в, казалось бы, совсем примитивных условиях (быстрые движения натренированных рук и понимание сути действий позволяют достичь очень высокого уровня стерильности - прим.ред.). Другие испытывают явные проблемы с постоянными заражениями и им приходится вкладываться в высокотехнологичные устройства контроля окружающей среды. Каждые конкретные условия вынуждают принимать определённые контрмеры. И независимо от того выращиваете ли вы грибы дома или организовываете работу лаборатории, вы испытаете одинаковые трудности отличающиеся лишь в масштабах.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АГАРА

Завершив обустройство стерильной лаборатории следующим шагом можно приступать к приготовлению питательного носителя на основе агара. Агар - это вырабатываемое из морских водорослей студнеобразующее вещество, наподобие, но несколько более эффективное, чем желатин. Существует много рецептов приготовления обогащенных агаровых носителей пригодных для разведения грибной культуры. Стандартными можно считать картофельный (Potato Dextrose Agar приготовления обогащенных агаровых носителей пригодных для разведения грибной культуры. Стандартными можно считать картофельный (Potato Dextrose Agar (PDA)) и солодовый (Malt Extract Agar (МЕА)) агары, которые нередко дополняют дрожжами в качестве питательной добавки. В микологических журналах часто упоминаются агары на пептоне и неопептоне - два самых доступных источника протеина для грибного мицелия. Есть ещё один тип агара, который авторы рекомендуют, на бульоне от варки ржи или пшеницы с добавлением солодового сахара (или мальтоза - дисахарид, образованный двумя остатками глюкозы).
Если вы испытываете трудности связанные с инфицированием бактериями, то добавление антибиотиков в питательный носитель предотвратит их размножение. Большинство антибиотиков, таких как стрептомицин, разрушаются в процессе автоклавирования и, поэтому их следует добавлять в агар после стерилизации, пока он жидкий. Один антибиотик, сульфат гентамицина, выдерживает автоклавирование и эффективен против широкого круга бактерий. Антибиотики негативно влияют на мицелий некоторых видов грибов.
Десятки обогащенных агаровых сред были успешно использованы для культивации грибов и у каждого грибовода складываются свои предпочтения основанные на личном опыте. Независимо от типа используемой агаровой среды, важнейшей её характеристикой является рН - логарифмическая шкала, отмечающая уровень кислотности или щёлочности в диапазоне от 0 (кислота) до 14 (щелочь), где 7 нейтральный уровень. Различные виды Psilocybe предпочитают носитель сбалансированный между 6,0-7,0, тогда как Agaricus brunnescens и близкие к нему лучше растут в нейтральной среде. По большей части мицелий достаточно терпелив и хорошо растёт в промежутке 5.5-7.5 рН. О показателе рН стоит беспокоиться только тогда, когда на носителе не прорастают споры или рост мицелия чрезвычайно замедлен (придется запастись лакмусовыми бумажками для оценки рН - прим.ред.).
Ниже приведены несколько формул сбалансированных питательных сред обогащенного агара, в высшей степени пригодных для выращивания мицелия видов Agaricus, Pleurotus, Lentinus, Stropharia, Lepisia, Flammulina, Volvariella, Panaeolus и Psilocybe. Из приведённых формул авторы предпочитают две: PDY (картофельный с декстрозой и дрожжами - Potato Dextrose Yeast) и MPG (зерновой с солодом и пептоном - Malt Peptone Grain) агаровые составы. Добавлением в любому составу молотой ржи или зернового экстракта можно добиться преобладающего роста нитевидного мицелия, т.е. наиболее предпочитаемого за его быстрый рост.
Выберите формулу, смешайте ингредиенты в сухом виде, поместите всё в мерную чашку и добавляйте воду пока не получите литр состава (дайте агару набухнуть перед стерилизацией - прим.ред.).

PDY (картофельный с декстрозой и дрожжами) агар
300 гр картофеля кипятить час в литре воды, отфильтровать
10 гр декстрозы (глюкозы)
20 гр дрожжей
20 гр агара

МЕА (агар на солодовом экстракте)
20 гр желто-коричневого солода
2 гр дрожжей (по усмотрению)
20 гр агара

(избегайте использования тёмного пивного карамелизованного солода, требуемый солод именно светлого, слегка подрумяненного цвета, более сыпучий и нелипкий)

MPG (агар зерновой с солодом и пептоном)
20 гр желто-коричневого солода
5 гр молотых зёрен ржи
5 гр пептона или неопептона
2 гр дрожжей (по усмотрению)
20 гр агара
(Прим. ред.: Если агар не удастся достать или купить, например, у китайцев, то можно попробовать взять цветной мармелад. Его следует измельчить и отмыть от всех пищевых добавок, выдерживая в воде несколько дней, периодически, несколько раз в день, меняя воду. Затем высушить.)
Для задерживания роста бактерий на каждый литр воды до стерилизации можно добавлять 0,1 гр 60-80% сульфата гентамицина (см. Приложение VII).
Качество воды, её рН и минеральный состав отличаются в зависимости от региона. Если качество вашей воды находится под сомнением, рекомендуем использовать дистиллированную воду. Для практических нужд, тем не менее, сгодиться и вода из водопровода, без особого вреда для мицелия. В некоторых случаях сбалансированный уровень рН важен, например, для проращивания спор или разведения мицелия экзотических видов грибов. Изменить рН носителя можно добавляя в него по капле соляной кислоты (HCl) или каустическую соду (NaOH) (вероятно сойдет уксус и пищевая сода - прим.ред.). Затем основательно перемешав состав, нужно снова измерить его уровень рН. (рН соляной кислоты -0; рН каустической соды - 12; рН дистиллированной воды - 7).

Тщательно смешав все ингредиенты стерилизуйте состав в скороварке в течении 30 минут при давлении в 1,05 атм (15 psi). (Скороварка является безопасным и эффективным средством стерилизации субстратов при условии использования строго в соответствии с инструкцией производителя - многие производители настолько помешаны на безопасности скороварок, что из-за всех их причиндалов, их скороварки вообще никуда не годятся, но изображенная на фотографии является неплохой - прим.ред.). Для автоклавирования агара рекомендуем использовать колбу с узким горлом. Если у вас нет специально приспособленного для этого сосуда, подойдёт любая похожая по форме бутылка. Обязательно заткните горлышко ватным тампоном и прикройте сверху фольгой до помещения в скороварку. Колбу можно наполнить только на 2/3-3/4 от полного объёма.
Наполненный сосуд поместите в скороварку налив достаточное для образования пара количество воды. (Обычно достаточно 1 см от дна). Приведите скороварку в рабочее состояние следуя инструкции производителя. Поставьте её на огонь и дождитесь появления густой струи пара. Выждав 4-5 минут закройте паровой клапан. Медленно поднимите давление до 1,05 ат (15 psi) и поддерживайте его в течении получаса. Не позволяйте температуре подниматься выше 121°С, в противном случае сахар в агаровой среде ат (15 psi) и поддерживайте его в течении получаса. Не позволяйте температуре подниматься выше 121°С, в противном случае сахар в агаровой среде карамелизуется. Карамелизованный сахар в носителе подавляет рост мицелия и повышает вероятность генетических мутаций.
В лаборатории следует иметь стерильную тряпичную ухватку или кусок свежевыстиранной ткани для удобства обращения с горячей посудой с агаром.
Время необходимое для стерилизации разнится в зависимости от высоты над уровнем моря. В неизменном объёме существует прямая зависимость между давлением и температурой (известная как закон Бойля-Мариотта). Когда рекомендуется определённое давление (равно как и температура), оно основано на стандартной высоте над уровнем моря. Культиваторам, проживающим в местах расположенных значительно выше уровня моря (например на Эвересте -прим.ред.), придётся стерилизовать дольше и при более высоком давлении, чтобы достигнуть того же эффекта. Ниже приведена сокращённая таблица, показывающая зависимость между давлением и температурой, и изменение температуры закипания воды на различных высотах. Увеличивайте рекомендованное давление исходя из температуры кипения воды зависящей от вашего положения над уровнем моря. К примеру на высоте в 1,5 километра температура кипения воды снизится приблизительно на 5,5°С. Это значит что давление необходимо увеличить до 1.4 ат (20 psi), т.е. на 0,35 от рекомендуемых 1,05 ат (15 psi). Смотрите в таблице требуемое давление при изменении температуры на 5°С. (На самом деле температура остаётся прежней, а вот давление изменится).

http://sci.aha.ru/ALL/bl7.htm - зависимость температуры кипения воды от давления


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 9:28 am 
Заметьте что эффект стерилизации получаемый при кипячении в течении 60 минут с давлением в 1,05 атм (15 psi) будет таким же от 30 минут с 2.1 ат (60 psi). Таким образом увеличение давления вдвое сократит время стерилизации вполовину. Но большинство скороварок не могут работать с таким давлением. Ещё некоторое время всё-таки стоит прибавить для достаточно хорошего проникновения пара в субстрат, особенно если используется большой и плотно загруженный автоклав (Прим.ред.: Не морочьте голову, большинство скороварок рассчитано на 1 атм давления пара. Если стерилизуемое богато микрофлорой и спорами, то следует стерилизовать 1,5 часа. Если стерилизуемое нестойко к температуре - то 15 мин. В остальных случаях 30 - 60 мин.).
После стерилизации поместите скороварку в лабораторию или комнату с условиями близкими к стерильным и, до того как откроете, дайте давлению в ней выровняться с атмосферным (то есть дайте остыть немного, а то при открывании все закипит; наличие давления можно проверять, слегка открывая клапан скороварки - прим.ред.). Одним литром агара можно сполна залить 30 чашек Петри размером 100 х 15 мм. Способы разлива агара отличаются от грибовода к грибоводу. Если нужно разлить только одну или две стопки по десять чашек, их можно разложить на рабочем столе все рядом. Если необходимо приготовить больше чем две стопки или поверхность рабочего стола ограничена, тогда более удобно будет разливать, перемещая чашки из стопки в стопку.
Прим.ред.:
При работе со спиртовым факелом (даже не в боксе), его в этом случае нужно создавать на металлической крышке от какой-либо банки.
Простерилизованную чашку Петри нужно ставить на какую-нибудь более высокую металлическую банку (из-под растворимого кофе, например), как можно ближе к факелу, чтобы поднимающий над пламенем горячий стерильный воздух не давал возможности приблизится к чашке спорам и микроорганизмам, содержащимся в металлическую банку (из-под растворимого кофе, например), как можно ближе к факелу, чтобы поднимающий над пламенем горячий стерильный воздух не давал возможности приблизится к чашке спорам и микроорганизмам, содержащимся в воздухе помещения. Свежевымытые, и еще слегка влажные, чашки Петри стерилизуются в скороварке. Для стерилизации их обычно заворачивают в плотную (от бумажных мешков) бумагу, несколько штук в одну упаковку. Поставьте в скороварку какую-нибудь подставку, чтобы упаковка не намокала. Конечно, речь идет о стеклянных чашках Петри. Пластмассовые, как правило, одноразовые, уже стерильны. Последние пригодны для работы только в ламинарных боксах.
Пробирки достать легче, чем чашки Петри. Лучше ориентироваться на них. Пробирки Закрываются ватными пробками. Для изготовления ватных пробок, разложите вату слоем, слегка обрызгайте водой и скатайте в плотный рулон. Обычно из рулона можно нарезать несколько, 2 - 4, пробок. На каждую натяните кусок марли, завяжите ниткой или тонкой бечевкой. Лишний хвостик марли удалите, он может вспыхнуть в пламени. После этого пробки нужно высушить каким-либо способом, иначе они могут заплесневеть. Или же только подсушить и сразу простерилизовать их. Пробирки стерилизуются также как чашки Петри. Чтобы пробки не намокали - верх каждой пробирки оборачивают плотной бумагой и обвязывают тонкой бечевкой или резинкой. Некоторые используют толстую фольгу. Многие помещают пробирки в скороварку для стерилизации в самодельном ведерке, сделанном из какой-либо металлической банки.
Если же не будет даже пробирок, то попробуйте использовать какие-нибудь маленькие бутылочки. Работать с ними хуже, стекло не термостойкое, при работе может пойти трещинами.

Перед разливом энергично взболтайте колбу с расплавленным агаром для равномерного распределения питательных веществ. Опытные культиваторы наполняют чашки в темпе и без перерывов. Если разливаемый агар всё ещё очень горячий, на крышке чашки Петри может образоваться конденсат. Чтобы уменьшить количество конденсата, можете подождать некоторое время, перед тем как разливать агар. Если после того как давление выровняется скороварка постоит еще 45 минут, то посуду с жидким носителем можно будет брать в руки не опасаясь обжечься.

ПОЛУЧЕНИЕ КУЛЬТУРЫ

От выбранного гриба можно получить два типа культуры : произвести новый мицелий из спор или клонировать живую ткань гриба (рекомендуем последний, как более стерильный - прим.ред.). Каждый из способов даёт в результате жизнеспособный мицелий. У обоих способов есть свои преимущества и недостатки. Большинство грибоводов начинают культуру из спор. Преимущество использования спор заключается в том, что они сохраняют всхожесть от недель до месяцев, после того как плодовое тело произведшее их разложилось. Другой путь получения культуры - вырезать кусочек ткани из внутренней части живого образца (на свежем, то есть стерильном, изломе - прим.ред.), в сущности клонировав его. Образец ткани для культуры необходимо взять в течение одного или двух дней, после того как гриб был сорван, иначе с каждым днём будет всё труднее получить здоровый клон мицелия (тем не менее удавалось клонировать грибы, купленные в магазине - прим.ред.).

ПОЛУЧЕНИЕ КУЛЬТУРЫ ИЗ СПОР

Получение спорового отпечатка
Для того чтобы собрать споры отделите шляпку от ножки свежего, хорошо очищенного гриба и положите её пластинками вниз на лист чистой белой бумаги или на чистую стеклянную поверхность, типа предметного стекла для микроскопа. Если шляпка частично высохла, добавьте каплю чистой воды для облегчения спороношения. Для уменьшения высыхания за счёт испарения и защиты от воздушных потоков накройте шляпку гриба чашкой или стеклом. Через несколько часов споры упадут в соответствии с радиальной симметрией гимениальных пластинок. Если вы использовали бумагу, вырежьте отпечаток, сложите пополам, положите в воздухонепроницаемый контейнер и надпишите дату, вид и номер сбора (или чашку Петри - прим.ред.). Если использовалось предметное стекло, то споры можно накрыть таким же стеклом и обернуть плёнкой во избежание проникновения спор контаминантов. Неаккуратно взятый или хранимый отпечаток, будет инфицирован (в этом и проблема -прим.ред.) и шансы на получение чистой культуры из него резко упадут.
Agaricus brunnescens, Psilocybe cubensis и многие другие виды грибов обладают частичной вуалью — тонким слоем ткани растягивающимся от краёв шляпки к ножке. Вуаль может помочь в получении спор почти свободных от контаминантов. Вуаль прикрывает пластинки снаружи, создавая практически стерильные условия внутри и споры можно получить не сильно опасаясь заражения. Выбрав молодой и здоровый образец с сохранившейся вуалью и затем убрав её в асептических условиях, можно получить практически чистый споровый отпечаток. Это идеальный путь для начала мультиспоровой культуры.


Вложения:
споровый отпечаток.jpg
споровый отпечаток.jpg [ 10.13 KIB | Просмотров: 3853 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:16 am 
Способы проращивания спор

Получив отпечаток, можно начинать производство грибной культуры. Простерилизуйте инокуляционную петлю или скальпель поместив его в пламя спиртовки или бутановой горелки на пять или десять секунд, пока он не разогреется докрасна. (Если используется бутановая горелка, приберите её пламя до минимума, чтобы минимизировать перемещение воздушных потоков). Охладите скальпель, поместив его кончик в стерильную среду в чашке Петри, и затем соскребите немного спор с отпечатка. Перенесите их на агар проведя по его поверхности скальпелем. Подобного результата можно добиться потерев скальпелем по отпечатку, так чтобы споры сами упали в открытую чашку Петри (на снимке, вместо чашки Петри, используется подходящая банка - прим.ред.). Начиная культуру со спор, желательно заразить как минимум три чашки с агаром, чтобы получить хорошие шансы на всхожесть. Мицелий выращенный таким образом
Только выпав из шляпки споры представляют собой влажные набухшие клетки с высоким процентом всхожести. С течением времени они высыхают, разрушаясь и сжимаясь ближе к центру, и им уже не так просто прорасти. Вероятность прорастания обезвоженных спор увеличивается после замачивания их в стерильной воде. Простерилизуйте в течении 30 минут при 1,05 ат (15 psi) пипетку или шприц и пробирку с водой или колбу Эрленмейера на 25-250 мл с горлышком заткнутым ватным тампоном (лучше ватной пробкой, делается также как для пробирок - прим.ред.) и накрытым алюминиевой фольгой. Возьмите немного спор на кончик скальпеля и опустите их в стерильную воду. Плотно закройте и дайте отстояться 6-12 часов. Выждав положенное время наберите немного воды со спорами в пипетку или шприц и проинокулируите несколько чашек с агаром одной или двумя каплями. Помните о том, что споровый отпечаток обычно берется в нестерильных условиях и таким способом вы даёте возможность прорасти не только грибным, но и спорам контаминантов.


Вложения:
проращивание спор.jpg
проращивание спор.jpg [ 32.89 KIB | Просмотров: 3851 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:19 am 
Характерные признаки грибного мицелия

Независимо от способа инокуляции или проращивания, заражение на любых начальных стадиях станет заметно уже на сроке от трёх до семи дней. Прорастающие споры выглядят как нитеподобные состоящие из клеток волоски исходящие из точки происхождения. Эти ниточки мицелия поначалу серые и разрозненные вскоре становятся белыми по мере ветвления соединяются перемычками, разрастаются и распространяются по носителю.


Вложения:
прорастающие споры.jpg
прорастающие споры.jpg [ 5.54 KIB | Просмотров: 3850 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:29 am 
Мицелий большинства видов, таких как Agaricus, Coprinus, Lentinus, Panaeolus и Psilocybe на вид имеет цвет от сероватого до белого. Другие виды имеют различную пигментацию мицелия. Мицелий Lepisfa nuda может быть заметно багрянисто-синим; у Psilocybe tampanensis часто разноцветный с уклоном в коричневые тона. Помните, однако, что цвет мицелия зависит даже от штамма или используемого типа субстрата. Другая сторона внешнего вида мицелия - это какой тип роста он показывает: воздушный или плотный, пушистый или корнеподобный. Воздушный мицелий может быть отличительной чертой вида или результатом избытка влаги. Плотный мицелий тоже может быть признаком вида или показателем сухих условий произрастания. Более детально типы мицелия обсуждаются ниже в подразделе о сегментировании.
После того как мицелий был определён как грибной, места произрастания спор следует перенести в новые чашки Петри с агаром. Таким образом, грибовод выборочно изолирует грибной мицелий, и вскоре получает чистую, свободную от заражений культуру. Если одновременно с мицелием на агаре появились признаки заражения, то участки с проросшим мицелием следует вырезать и удалить от колоний контаминантов. Т.к. большинство распространённых контаминантов это плесени размножающиеся спорами, будьте осторожны и постарайтесь не трясти ёмкость с культурой, и не делайте ничего, что могло бы рассыпать споры. Также перед тем как резать агар убедитесь, что скальпель охлаждён. Раскалённый скальпель при соприкосновении с агаром произведёт реактивный выброс пара, что в пределах пространства чашки Петри вызовет перемещение воздуха и рассеет споры соседствующих плесеней.

Ответвления мультиспоровой культуры

Мультиспоровая культура это наименее сложный способ получения жизнеспособного мицелия, но не абсолютно чистого штамма. Прорастая в большом количестве, споры фактически создают множество штаммов, некоторые из которых несовместимы с другими, обладают разными потенциалами роста и нуждаются в различных условиях для плодоношения. Такая смесь штаммов подавляет рост более активных из них. В целом штаммы, полученные из спор, с большой вероятностью наследуют свойства своих предков. Если родители быстро захватывали субстрат и хорошо плодоносили в лабораторных условиях, то можно ожидать схожего поведения и от потомства. Культуры же, полученные от дикорастущих образцов, но испорченные в искусственных условиях, обычно плодоносят плохо. Как и в случае с дикорастущими растениями, штаммы дикорастущих грибов необходимо совершенствовать селекцией.
Из многих штаммов получаемых из спор некоторые могут быть способны только на вегетативный рост. Такой мицелий может усваивать питательные вещества, но не способен образовывать плодовые тела (следствие генеративного роста). Клеточная сеть, растущая из единственной споры, называется монокариотической. Монокариоты не способны к производству спорообразующих плодовых тел. При встрече и слиянии двух совместимых монокариотов происходит обмен цитоплазматическим и генным материалом. Полученный в результате дикариотический мицелий уже может производить плодовитое потомство. Сетеобразное объединение ветвей различных дикариотических штаммов называется анастомоз. Такая рекомбинация возможна на любой стадии выращивания мицелия: на агаре, зерне, или уже в бедном субстрате. Подобные пересечения грибных штаммов аналогичны созданию гибридов в садоводстве.
Другой способ создания культуры заключается в выделении отдельных спор разбавлением в объёме стерильной воды. Далее эта споровая взвесь разводится ещё большим количеством стерильной воды, которое уже в свою очередь и используется для инокуляции чашек с носителем. В этом случае культиватор получает возможность наблюдать за отдельными монокариотами и самостоятельно управлять процессами слияния для выведения высокоурожайных штаммов. Грибоводы, нуждающиеся исключительно лишь в получении жизнеспособных культур, эту технику могут опустить, т.к. их должно полностью удовлетворить мультиспоровое разведение. Но для тех, кто заинтересован в скрещивании монокариотических штаммов и изучении характеристик получаемых таким образом культур, этот метод окажется бесценным. Помните, что из сотни спор прорастает в среднем от одной до пяти. Штаммы и генетика штаммов более детально обсуждаются в Главе XV.
Наибольшая опасность в приготовлении концентрированных мультиспоровых взвесей скрывается в увеличенной вероятности заражения, особенно бактериального. Некоторые бактерии паразитируют на клеточных оболочках мицелия, тогда как другие стимулируют прорастание спор для дальнейшего перемещения и медленного переваривания самого мицелия. Поэтому некоторые штаммы нездоровы изначально и обычно ассоциируются с высоким уровнем заражений. При попытке прорастить споры в очень большом количестве, те из них, что уже инфицированы, увеличивают вероятность распространения болезни на соседние.
Многие грибы, тем не менее, образуют уникальные симбиотические связи с другими микроорганизмами. Как ни удивительно, некоторые бактерии и дрожжи стимулируют развитие спор, которые в случае стерильной культуры было бы сложно прорастить. Споры Cantharellus cibarius, обычной и высоко ценимой лисички, не прорастали в искусственных условиях, противостоя усилиям лучших микологов мира. Но относительно недавно шведский миколог Nils Fries (1979) установил, что при добавлении в среду активированного угля и красных дрожжей (Rhodotorula glutinis (Fres.) Harrison) споры вскоре успешно прорастают. (Использование активированного угля рекомендуется для любых грибов с затруднённой всхожестью спор.)
Многие грибоводы сообщают, что определённые культуры пышно разрастаются при случайном заражении или намеренном внесении бактерий. Было установлено что Pseudomonas putida, Bacillus megaterium, Azotobacter vinelandii и некоторые другие микробы оказывают схожий эффект на различные виды грибов — и на прорастание спор, и на рост мицелия или образование плодовых тел. (Curto и Favelli, 1972; использование этих бактерий рассматривается в Приложении III). Однако большинство контаминантов с которыми приходится сталкиваться при разведении грибов, перенесены ли они воздушным путём или уже находились на спорах, делу не помогают. Из всех конкурентов наиболее пагубны бактерии. Прилежное соблюдение норм лабораторной гигиены, использование НЕРА-фильтров и правильные методы лабораторной работы призваны справится с этой напастью.

ПОЛУЧЕНИЕ КУЛЬТУРЫ ИЗ ЖИВОЙ ТКАНИ
Культура из ткани является гарантированным способом сохранения соответствующих генетических признаков конкретного гриба. Мицелий, полученный из ткани, в точности клонирует образец, тогда как мультиспоровая культура образует новый штамм. Ткань для клонирования гриба необходимо брать в течении 24-48 часов с момента сбора. Выделение чистой культуры вызовет затруднения, если образец уже пролежал несколько дней, слишком сухой или перезрелый. С другой стороны споры сохраняются в течение долгого времени.
Так как весь гриб состоит из уплотнённого мицелия, то жизнеспособную культуру можно получить из любой части плодового тела гриба. Шляпка, верхняя часть ножки и/или область где пластинки соединяются с нижней частью шляпки, являются лучшими местами для иссечения чистой ткани. Шляпку некоторых грибов покрывает кутикула. Сорвав эту тонкую кожицу также можно взять ткань из мякоти расположенной под ней. Протрите поверхность гриба ватным тампоном смоченным в спирте и удалите всю грязь и повреждённую внешнюю ткань. Надломите шляпку или ножку гриба, обнажая его внутренние гифы.
Незамедлительно разогрейте скальпель докрасна и остудите его в чашке Петри со средой. Теперь надрежьте мякоть и извлеките маленький кусочек ткани гриба. Перенесите этот фрагмент ткани в центр чашки Петри с питательной средой как можно быстрее, избегая продолжительного контакта, как ткани так и агара с открытым воздухом. Повторите все действия и поместите культуру ещё в три или еще лучше пять чашек. Пометьте каждую чашку видом гриба, датой, типом культуры (ткань) и разновидностью агаровой среды. При благоприятном стечении обстоятельств по прошествии от трёх до семи дней рост мицелия будет очевиден.
10% - это общесредний уровень заражений, с которым грибовод может смириться (да, начинающий - прим.ред.). Тем не менее в первичных культурах, когда образцы берутся от диких видов, не будет чем-то необычным уровень контаминации в 25%. Разнообразные и красочные заражения появляются обычно недалеко от точки пересадки на агар. Количество появившихся контаминантов зависит от чистоты образца ткани или спор, а также от гигиенический условий лаборатории. В культуре клонированной из ткани гриба чаще всего встречаются бактериальные заражения.
Заражение это факт жизни каждого грибовода. Контаминанты только тогда становятся проблемой, когда их количество увеличивается сверх всяких разумных пределов, что можно считать признаком грядущей катастрофы в лаборатории. Если пять, десять или даже пятнадцать процентов можно считать нормальным уровнем контаминации для любого культиватора, то резкий скачок без каких-либо видимых изменений в условиях поддержания гигиены может стать причиной для поисков новых способов борьбы.
Как только ткань покажет признаки роста, её следует переместить в другую чашку. Если нет явных признаков заражения, то быстрая пересадка не столь необходима. Если по соседству уже развивается плесень и готовится выбросить споры, то культуру следует сразу же изолировать. Продолжайте переносить культуру, отделяя её от контаминантов, пока не получите чистый штамм. Очевидно, что выделить мицелий из частично заражённой культуры, гораздо сложнее, чем пересадить из чистой. Попытки изолировать мицелий от соседствующих контаминантов усложняются опасностью распространения их спор. К тому же незримо для нас, когда мы поднимаем крышку чашки Петри в неё врывается внешний воздух и споры плесени разносятся его потоками в атмосферу лаборатории. Таким образом, чем быстрее культиватор обретёт независимость от инфицированных чашек, тем скорее сможет вывести чистую культуру. Тем не менее помните, что не смотря на то что невооружённому глазу культура может казаться чистой, в ней всё ещё могут скрываться споры контаминантов. Присутствие затаившихся плесеней или бактерий в мицелии станет видимым только тогда, когда вы инокулируете им стерильное зерно.
Различные меры могут быть предприняты для минимизации уровня Заражения в лаборатории. Мы уже обсудили применение распыляемого масла, НЕРА-фильтров и главбоксов. Но ваше личное отношение к заражению и чистоте в лаборатории много важнее любой её части. Авторам случалось видеть высокотехнологичные лаборатории с высоким уровнем контаминации и чуланы с относительно низким. Дадим два совета придерживаясь которых начинающие культиваторы должны преуспеть:
1. Приложите максимум стараний к первой попытке создания стерильной культуры. Всё должно быть чисто: лаборатория, одежда, инструменты и особенно сам культиватор (главное - это все-таки техника движений рук, ее нужно отрабатывать и совершенствовать, иначе вам даже НЕРА не поможет — прим.ред.).
2. Получив чистую культуру, примените максимум усилий для поддержания её чистоты. Сохраняйте только те чашки Петри, в которых нет признаков плесени или бактерий. Выбрасывайте все инфицированные чашки, несмотря на то что они могут быть заражены только частично.
Не отчаивайтесь, если столкнётесь с неудачей после первой попытки. Работа со стерильными культурами пойдёт просто и гладко, но только после некоторой практики, когда вы наберётесь немного опыта.
Работа с агаром это только первый шаг в разведении грибов. Для выращивания грибов сам по себе агар непрактичен. Его преимущества, для работы с грибной культурой, заключаются в возможности быстро разрастить мицелий из малейшего кусочка ткани. И достаточно легко поддерживать чистоту такой культуры, т.к. любое заражение легко заметить на плоской поверхности агаровой среды в чашке Петри.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:36 am 
СЕГМЕНТИРОВАНИЕ: СЕЛЕКЦИЯ И УЛУЧШЕНИЕ ШТАММОВ

Захватывая поверхность агара мицелий демонстрирует поразительное разнообразие форм. Некоторые культуры довольно однообразны на вид, тогда как другие поначалу проявляя полиморфность (неоднородность) позже неожиданно развиваются в гомогенный (однородный) мицелий. В этом природа мицелия -непрерывно изменяться и эволюционировать.
Мицелий называется сегментированным, когда, развиваясь из единственной точки инокуляции в разные стороны, он показывает разные типы роста. Сегмент определяется исключительно по внешнему виду, контрастирующему с окружающим преобладающим типом мицелием. Существует два основных типа роста мицелия: ризоморфный (корнеобразный, нитевидный) и войлочно-опушённый (ватный, облачками). К тому же встречаются и промежуточные типы линейного роста, ориентированные относительно радиальных направляющих (к стенкам чашки), но не имеющие выраженных скрученных нитей или переплетённых гифов характерных для ризоморфного типа роста. Ризоморфный мицелий более предрасположен к образованию примордий. Линейный мицелий тоже склонен к обильному образованию примордий, но делает это обычно после того как преобразуется в ризоморфный. Однако не забывайте о том, что характеристики внешнего вида плодоносящего мицелия так же зависят о разновидности гриба и могут немного отличаться от приведённых выше.
В чашке плотно поросшей ватным мицелием, веероподобная веточка жилистого мицелия будет называться ризоморфным сектором, и наоборот. Сегментирование очень часто встречается на культуре грибов, но так же очень мало известно о назначении и причинах появления сегментов. Очевидно, что большую роль в этом играют генетические свойства, возраст мицелия и состав питательной среды.
Согласно Stoller (1962) рост пушистых сегментов обусловлен присутствием в субстрате взорванных или сломанных зёрен, которые увеличивают содержание крахмала в носителе грибницы. Работая с Agaricus brunnescens Stoller заметил, что рост мицеля быстрее при высоких Значениях рН (7,5), чем при отклонении рН в кислотность (6,5), но сегментирование случается чаще. Он выяснил что сегментирование на зерне можно сократить, уменьшив количество раскрывшихся зёрен (результат наличия избыточной влаги), и понизив рН до 6,5 используя комбинацию мела (углекислый карбонат кальция) и гипса (сульфат кальция).
Коммерческие грибоводы давно заметили, что медленно растущий ватный мицелий уступает более быстрому ризоморфному. Существует несомненная зависимость между пушистым видом мицелия на агаре и последующим образованием «стромы», плотного сплетения гифов мицелия покрывающего кейсинг, через которое редко прорастают грибы. Кроме того, примордии чаще образуются на ориентированном на плодообразование ризоморфном, нежели на склонном к вегетативному росту ватном мицелии. И ещё один интересный факт: при наблюдении под микроскопом гифы ризоморфного мицелия выглядят более толстыми и менее разветвлёнными, чем у ватного.
Ризоморфный мицелий быстрее захватывает субстрат, образует больше примордии и в результате лучше плодоносит, чем пушистый мицелий. Это видно на Фото 37. Ломтик был пересажен на агар и из него выросли два различных типа мицелия. Сегмент с нитевидным ростом образовал многочисленные примордии, тогда как на ватном мицелии ничего не появилось - такое часто случается на агаре.
По мере роста мицелий постепенно начинает стареть. Стареющий мицелий, как и любое пожилое растение или животное, гораздо менее жизнеспособен и плодовит, чем молодой. Вообще превращение мицелия, из нитевидного в ватный, служит сигналом начала вырождения штамма. Если культура изначально ризоморфная со временем начинает сегментироваться, существует несколько способов предотвращения деградации штамма и сохранения ризоморфизма.
1. Производить пересадку только ризоморфных секторов и избегать ватных.
2. Регулярно меняйте питательный носитель, используя приведённые здесь формулы. Не желательно использовать одну и ту же агаровую среду, так как питательный состав носителя выборочно воздействует на возможность выработки различных пищеварительный ферментов грибным мицелием. Изменение компонентов среды позволяет сохранить широкую ориентированность пищеварительной системы и повысить выживаемость мицелия. Виды сильно отличаются по своим предпочтениям. И если у вас нет определённых данных на этот счёт, то вам придется идти путём проб и ошибок.
3. Получив количество мицелия, необходимое для производства грибницы, верните штамм на хранение до следующего использования. Не ждите что мицелий, росший несколько лет при оптимальных температурах, сохранит свойства первоначальной культуры, из которой он был получен. Вследствие многочисленных делений клеток и непрерывных пересадок с большой вероятностью выделился подштамм, который имеет отдалённое сходство с жизнеспособностью, внешним видом и потенциалом плодоношения оригинала.
4. Если все усилия направленные на сохранение жизнеспособного штамма провалились, следует выделить новый из мультиспоровой культуры.
5. Другой альтернативой являются постоянные эксперименты с целью создания гибрида штаммов скрещивая дикариотические мицелии двух генетически отличающихся родителей. (Однако эксперименты с Agaricus brunnescens показали что большая часть гибридов плодоносит меньше, чем кто-либо из задействованных в скрещивании штаммов. И лишь меньшая их часть даёт хорошие урожаи.)

Домашние культиваторы могут выборочно развивать штаммы грибов выбирая мицелий по следующим нескольким признакам:
1. Ризоморфизм - быстро развивающийся и разрастающийся мицелий
2. Чистота штамма - отсутствие ватных секторов.
3. Чистота мицелия - отсутствие конкурирующих микроорганизмов (бактерий, плесеней и клещей).
4. Время задержки реакции в ответ на создание условий благоприятствующих образованию примордий.
5. Количество появившихся примордий.
6. Коэффициент прорастания появившихся примордий.
7. Размер, форма и/или цвет плодовых тел.
8. Общий урожай.
9. Сопротивляемость заболеваниям.
10. Чувствительность/переносимость С02.
11. Температурные ограничения.
12. Простота сбора урожая.
Используя эти характерные особенности, грибные селекционеры могут разумно оценивать качество штаммов, и со временем научатся выбирать из них те, которые наилучшим образом соответствуют их предпочтениям.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:40 am 
ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР: СПОСОБЫ КОНСЕРВАЦИИ ГРИБНЫХ ШТАММОВ

Получив чистый изолированный штамм, благоразумным решением будет сохранить его путём консервации. Консервированные культуры или как их обычно называют «скосы» - это стеклянные пробирки наполненные стерильным носителем и проинокулировэнные мицелием. Подходящий размер пробирки для хранения культур 20x100 мм, с плотно подогнанной пробкой. У каждого опытного культиватора имеется своя коллекция культур называемая «банк видов». Банк видов является неотъемлемой частью процесса разведения грибов. С его помощью грибовод может сохранять штаммы годами.
Для приготовления скосов сначала смешайте компоненты агаровой среды, используя обсуждавшиеся выше в этой главе формулы. Наполните пробирки на треть от их высоты, заткните ватным тампоном и накройте алюминиевой фольгой, или просто закройте пробкой подходящего размера. Стерилизуйте в скороварке 30 минут при давлении в 1,05 атм (15 psi). Дождитесь пока давление в скороварке сровняется с атмосферным и переместите её в стерильную комнату не открывая. Достаньте пробирки, мягко взболтайте их для равномерного распределения питательных веществ и расположите их под углом 15-30 градусов до охлаждения и затвердевания.
По мере готовности проинокулируйте скосы фрагментами мицелия. Пометьте каждую пробирку датой, типом агара, видом и штаммом. Для подстраховки сделайте как минимум три скоса на каждый штамм. Инкубируйте в течении недели при температуре 24°С. Как только мицелий покроет основную поверхность агара и на поверку окажется свободным от заражений, помещайте на хранение при температуре 2-4°С. При таких температурах снижается метаболическая активность большей части мицелия и практически прекращается поглощение питательных веществ. В идеале неплохо бы проверять жизнеспособность хранимого мицелия каждые полгода, высаживая его фрагменты в новые чашки Петри. После того как мицелий захватит 2/3 поверхности носителя в чашке, отберите сильный (ризоморфный) мицелий и проинокулируйте новые скосы. Подпишите и храните их пока они вам не понадобятся. Зачастую, проращивание такой миникультуры становится хорошей проверкой хранимого штамма на всхожесть и плодовитость.
Превосходным способом сохранения культур является передача дубликатов видов и штаммов знакомым коллегам культиваторам. Штаммы грибов теряются, иногда с большей лёгкостью, чем от них того ожидают. А, потеряв, вы никогда уже не сможете их вернуть.
Вышеописанный метод помогает надёжно сохранять культуры в большинстве случаев. Тем не менее, некоторые алчные культиваторы с лёгкостью могут обзавестись пятидесятью, а то и сотней штаммов и необходимость постоянного поддержания их жизнеспособности может стать утомительной и обременительной. Когда библиотека культур разрастается до таких объёмов, существует несколько дополнительных мер позволяющих увеличить срок хранения штаммов.
Простейший способ консервации культур на долгий срок использует тонкий слой стерильного минерального масла наносимого на живой мицелий после его прорастания в пробирке. Минеральное масло не токсично для мицелия, сильно снижает его метаболизм и препятствует испарению влаги из агаровой основы. После этого культура хранится при 3-5°С до востребования. Недавние исследования (Perrin, 1979) показали, что все 30 видов грибов хранимых под минеральным маслом на протяжении 27 лет произвели живой мицелий. Для возобновления штаммов скосы были перевёрнуты вверх ногами для того чтобы стекло масло, и затем инкубированы при 25"С. В течение трёх недель каждый скос показал обновлённые признаки роста и, будучи перенесёнными на агар, дали незаражённые культуры.
Четыре других способа консервации включают: погружение скосов в жидкий азот (дорогостоящая процедура); инокуляция стерильного компоста на основе конского навоза и соломы с последующим хранением при 2-3°С (см. Главу V о приготовлении компоста); инокуляция носителя на основе опилок и отрубей мицелием грибов предпочитающих дерево (см. Главу III об альтернативных носителях мицелия); или хранение спор в темном прохладном месте - возможно наипростейший способ для домашних культиваторов.
Независимо от используемого способа консервации помните, что для грибов естественно плодоносить, спорулировать и развиваться. Методы культивации должны развиваться вместе с грибами и культиватор должен выборочно изолировать и поддерживать многообещающие штаммы по мере их появления. Так что не удивляйтесь, если спустя пять лет хранения, штамм слабо похож на оригинальный по характеристикам плодоношения и форме.


Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 10:49 am 
ГЛАВА 3. РАБОТА С ЗЕРНОМ

РАЗВИТИЕ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ЗЕРНОВОЙ ГРИБНИЦЫ

Зерновая грибница используется для инокуляции приготовленного субстрата. Она состоит из материала-носителя полностью колонизированного мицелием. Тип носителя зависит от вида культивируемых грибов, хотя большинство изготовителей зерновой грибницы выбирают рожь. История развития способов приготовления инокуляционного материала для выращивания Agaricus brunnescens наглядно демонстрирует прогресс в этой области за последние 100 лет.
В 19 веке культиваторы Agaricus получали инокуляционный материал собирая его в естественных условиях произрастания. Далее такую «девственную грибницу» дополняли такими же естественными питательными материалами, в данном случае конским навозом. Также иногда использовался отработанный субстрат от предшествующих заходов. Такого рода инокуляционный материал содержал большое количество контаминантов и паразитов, в результате урожай получался небольшим. Для перехода к более серьёзному, коммерчески выгодному выращиванию грибов необходимо было разработать методики гарантирующие получение качественного мицелия в больших количествах.
Появление техник работы с чистой культурой, размножение мицелия путём проращивания спор или клонирования ткани грибов сменило собой использование дикорастущей грибницы. С этого момента культиваторы смогли быть уверенными не только в качестве инокуляционного материала, но и с некоторой долей достоверности прогнозировать свойства штамма. Впервые в истории появилась возможность селекции и развития высокоурожайных штаммов благодаря возможности сохранения культуры на специально приготовленном субстрате. Стерилизованный, мелкопорубленный компост стал наиболее предпочитаемым носителем исходной чистой культуры и на годы вперёд стал стандартом индустрии производства Аgагicus.
В 1932 г. доктор Джеймс Синден запатентовал процесс приготовления инокуляционного материала использующий зерно как носитель мицелия. С тех пор наиболее используемым зерновым злаком стала рожь, хотя также использовали и просо, и пшено, и пшеницу. Новаторский подход Синдена установил новый стандарт изготовления зернового мицелия и сформировал базу современной индустрии. Ощутимое преимущество Зернового мицелия Заключается в увеличенном количестве точек инокуляции. Каждое отдельное зёрнышко становится такой точкой, от которой может разрастаться мицелий. Таким образом, литр грибницы на ржи, содержит приблизительно 25 тысяч зёрен, и представляет собой неоспоримое превосходство над более грубым инокуляционными материалами.
Ниже перечислены злаковые крупы пригодные для приготовления грибницы. Непосредственно за этим списком следует таблица, иллюстрирующая некоторые физические свойства важные для приготовления субстрата.
РИС: используют немногие культиваторы, даже придерживаясь правильных уровней влажности трудно избежать слипания отдельных зёрен, в виду клейких свойств внешнего покрытия
ПРОСО: хотя предоставляет большее количество точек инокуляции, чем рожь, немного сложнее на его основе изготовить носитель грибницы. Amycel (компания изготовитель зерновой грибницы) разработала формулу приготовления проса и использует его как основной носитель для приготовления коммерческих образцов субстрата.
СОРГО: обладает зернами круглой формы и работает относительно неплохо как носитель грибницы, но его сложно раздобыть.
ПШЕНИЦА: одинаково хороша для приготовления грибницы и выращивания плодовых тел.
СЕМЕНА ПЫРЕЙЯ и РАЙГРАСА (знать бы, что это такое - прим.ред.): оба обладают большим количеством ядрышек на грамм, чем зерно. Минусы использования этих семян заключаются в их склонности терять влагу и неспособности разбиваться на отдельные ядрышки, отчего их сложно встряхивать (семена пырейя и райграса широко используются для развития склероций Psilocybe tampanensis, Psilocybe mexicana и Psilocybe armandii. Могут быть использованы годовалые и многолетние семена, хотя годовалые более дёшевы. Дополнительные параметры по этим видам грибов смотрите в 11-й главе этой книги)
РОЖЬ: доступность, низкая стоимость и хорошая способность разделятся на отдельные зёрна, являются свойствами, позволяющими рекомендовать её для использования в качестве субстрата для выращивания мицелия и плодоношения.

ЗЕРНОВЫЕ ЗЛАКИ И ИХ ФИЗИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
(подсчёты проводились авторам книги)


Вложения:
ЗЕРНОВЫЕ ЗЛАКИ.jpg
ЗЕРНОВЫЕ ЗЛАКИ.jpg [ 29.4 KIB | Просмотров: 3843 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 11:00 am 
В одном единственном грамме с/х ржи (Secale cereale) по приблизительным оценкам количества отдельных клеток присутствуют 50'000-100000 бактерий, более 200'000 актиномицетов, 12'000 грибков и плесеней, а также большое количество дрожжей. Таким образом стерилизация уничтожает приблизительно 300'000 контаминантов! В банке с зерном, весом превышающим сто грамм, с добавлением воды количество клеток в популяциях живых организмов достигает астрономических высот. Из всех десяти групп таких организмов бактерии являются наиболее пагубными. В таких условиях одна единственная бактерия размножается до более чем миллиона экземпляров эа менее чем десять часов. Ещё за десять часов каждая из этих бактерий произведёт ещё по миллиону копий. Если только маленькая толика всех этих микроорганизмов переживёт стерилизацию, они смогут превратить зерно в бесполезную массу всего за несколько дней.
Большинство микроорганизмов уничтожаются во время стерилизации. Для жидкостей стандартное время паровой стерилизации составляет 25 минут при давлении в 1,05 атмосферы или 15 psi (120°C). Для твёрдых объектов, таких как рожь, время стерилизации следует увеличить, чтобы позволить пару проникнуть во все воздушные карманы и впадины свойственные структуре зёрен. В пределах этих углублений бактерии и другие термостойкие организмы, будучи защищены от разрушающего воздействия пара, получают лучшие шансы пережить короткий период стерилизации, нежели долгий. Следовательно, полный час - это минимально рекомендуемое время стерилизации банок с зерном.
Некоторые партии зерна имеют необычайно высокое содержание бактерий и плесеней. Уровень контаминации такого зерна остаётся относительно высоким даже после автоклавирования перед инокуляцией. От такого материала стоит немедленно избавиться и заменить его зерном известного качества.
После того как зерно было простерилизовано можно считать, что все конкуренты нейтрализованы. Следующим наиболее вероятным источником контаминации может послужить воздух, непосредственно окружающий банки. По мере того как банки остывают они засасывают воздух вместе с воздушными контаминантами. Если содержание вредоносных спор во внешней среде достаточно высоко, некоторые из них будут внесены в субстрат ещё даже до первой инокуляции! В обычной комнате в одном кубическом метре содержится приблизительно 350000 частиц, размер которых превышает 0,3 микрона (это пыль, споры и пр.), тогда как в «стерильной» лаборатории приблизительно 3'500. Зная об этих фактах, вы можете провести ещё две следующих процедуры, которые позволят снизить шанс заражения:
1. Если вы стерилизуете зерновой субстрат вне лаборатории в нестерильных условиях (на кухне к примеру), не забудьте начисто вымыть скороварку до того как перенесёте её в стерильную инокуляционную комнату.
2. Инокулируйте банки, как только они достигнут комнатной температуры, несмотря на то, что многие культиваторы оставляют банки на ночь в скороварке, это является нежелательным.
Объём воды, добавляемый в зерно, является очень важным фактором влияющим на вероятность заражения. Излишняя влага в банке с грибницей способствует размножению бактерий и других конкурентов. На влажном зерне грибной мицелий уплотняется и замедляется в росте. Переувлажнённые зёрна взрываются в процессе стерилизации, а внутренняя часть зерна ещё больше подвержена заражению. Также влажное зерно, сплетённое мицелием, слипается и его трудно разделить между собой. Когда такое зерно вступает в контакт с нестерильными субстратами, например компостом, оно чаще становится причиной заражения. С грибницей, уровень влажности которой сбалансирован, таких проблем не возникает. Она легко разделяется на отдельные зерна, покрытые мицелием, увеличивая тем самым количество точек инокуляции, каждая из которых становится источником роста сети мицелия.
Определить точную влажность зерна несложно. Единожды высчитав её для имеющегося зерна, культиватор будет точно знать какое количество воды надо добавить в зерно. Находящаяся в продаже рожь для проращивания содержит 11% воды от общей массы (±2 процента). Точное содержание влаги в зерне можно просто подсчитать, отняв вес зерна просушенного в духовке (3 часа при 120°С) от исходного его веса. Полученная цифра и есть естественная доля влаги в зерне.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЗЕРНОВОЙ ГРИБНИЦЫ

Оптимальная влажность Зерна для приготовления субстрата для грибницы находиться между 49-54%. Нижеследующие составы используют хлебную рожь, обычная влажность которой составляет 11%. Следует ожидать некоторых отклонений зависящих от производителя, размера ядра, географии произрастания и условий хранения зерна.
Стандартными ёмкостями для грибницы для домашнего культиватора можно считать литровые банки, а для крупных производителей 4-х литровые. Домашние культиваторы также широко использовали банки с широким горлом, благодаря нескольким книгам популяризирующим плодоношение прямо в этих банках. Предполагалось, что из банок с широким горлом урожай собирать легче, чем из обычных. Но не только этот метод непрактичен как устаревший, но и банки с широким горлом имеют несколько серьёзных недостатков и, таким образом, не могут быть рекомендованы к использованию. Стандартные банки с узким горлом дают воздушным контаминантам меньше возможностей проникнуть внутрь и на их крышках проще использовать синтетические фильтрующие диски. Назначение контейнера для грибницы - дать временный приют и создать благоприятные условия для развития мицелия, до того как он будет выложен в лотки или использован для инокуляции бедных субстратов. Банки не очень хорошо подходят для использования в качестве контейнера при плодоношении. Многие промышленные производители грибницы используют синтетические диски в качестве фильтров, которые обеспечивают проникновение воздуха и свободный газообмен, но задерживают вредоносные споры. Домашние же культиваторы используют не полностью закрученные резьбовые крышки, которые пропускают некоторое количество воздуха. Такой способ неплохо работает в условиях близких к стерильным, но не обеспечивает никакой зашиты. Лучшим вариантом была бы крышка с просверлённым в ней отверстием диаметром 9-12 мм, прикрытым фильтром (лучше с отверстием побольше, заткнутым ватной пробкой - прим.ред.). Лично авторы находят использование 2 л банок идеальным вариантом. (Заметьте, что такие банки следует инокулировать путём переноса зерна из мастер-банки -техника, которая будет объяснена ниже в данной главе). Использование фильтра на весь размер крышки у банок с широким горлом не рекомендуется, в связи с повышенным уровнем испарения влаги из зерна.


Вложения:
фильтр.jpg
фильтр.jpg [ 23.93 KIB | Просмотров: 3842 ]
Вернуться наверх
  
 
 Заголовок сообщения:
СообщениеДобавлено: Пт июн 08, 2007 11:05 am 
Чтобы получить зерно с влажностью 48-52% используйте смеси, приведённые ниже, и автоклавируите в скороварке 1 час при давлении 1,05 атмосферы (15-18 psi). Примите во внимание, что столовые мерные чашки не достаточно точны и ошибка может достигать 10% от объёма. Проверьте вашу мерную чашку специальным градуированным цилиндром. Выяснив точность, используйте мерную чашку для зерна и мерную чашку для воды для соблюдения пропорций приведённых ниже:

СМЕСИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЗЕРНА

ДЛЯ ЛИТРОВЫХ БАНОК
1 чашка ржи
2/3 - 3/4 чашки воды
(или приблизительно)
240 мл ржи
170-200 мл воды

ДЛЯ 2-Х ЛИТРОВЫХ БАНОК
3 чашки ржи
1 и 3/4 чашки воды
(или приблизительно)
600 мл ржи
400-460 мл воды
Данные смеси позволяют добиться заполнения банки на 2/3 после автоклавирования. В качестве добавки к этим формулам можно использовать мел/известь (СаСОЗ) и гипс (CaS04) в пропорции 1-3 части по весу к 100 частям зерна (сухой вес). Соотношение мела и гипса 1:4. Добавление этих ингредиентов в субстрат опционально для большинства видов, но необходимо при выращивании Agaricus brunnescens. В варианте с использованием известкового буфера к формулам стоит добавить ещё 10% воды.


Вложения:
приготовление зерна.jpg
приготовление зерна.jpg [ 30.41 KIB | Просмотров: 3841 ]
Вернуться наверх
  
 
Показать сообщения за:  Сортировать по:  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 68 ]  На страницу 1, 2, 3  След.

Часовой пояс: UTC + 2 часа


Кто сейчас на форуме

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 1


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
cron
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group
Русская поддержка phpBB

sadasdasdas