Интересные статьи

Обо всем, кроме политики
Lor7ik

Сообщение Lor7ik »

После того как заполненные по формуле банки были автоклавированны, их следует перенести в стерильную комнату и остудить до комнатной температуры. До момента внесения банок в стерильную комнату окружающий воздух следует обеззараживать используя стандартные методы дезинфекции или НЕРА-фильтры (или и то и другое).
Вынув банку из скороварки или автоклава её следует перетряхнуть для того чтобы разрыхлить Зерно и перемешать сухие и влажные зёрна. Перетряхивание также позволяет избежать слипания зерна на дне банки.
Превосходным инструментом упрощающим процедуру перетряхивания может послужить лысая автопокрышка или обитый стул. Тщательно очищенная и продезинфицированная шина должа быть установлена в вертикальное и устойчивое положение. Поверхность покрышки идеально подходит для соударения при перетряхивании, уменьшает дискомфорт для рук и позволяет избежать травм, если банка разобьётся. Шина будет использоваться и на других стадиях развития зерновой культуры, так что мойте её регулярно. В тех же целях промышленные производители Зерновой грибницы используют мешалки для краски, но это неприемлемо в домашних условиях. ВНИМАНИЕ: ВСЕГДА ПРОВЕРЯЙТЕ БАНКИ НА ПРЕДМЕТ НАЛИЧИЯ ДЕФЕКТОВ ПЕРЕД ПЕРЕТРЯХИВАНИЕМ.
Когда банки достигли комнатной температуры можно начинать инокуляцию зерна мицелием с агара. Ещё раз: очень важно соблюдение хорошей гигиены. При переносе мицелия с агара на зерно добавляется ещё одно измерение в котором могут распространятся контаминанты. На агаре мицелий захватывает двухмерную плоскую поверхность и легко заметить заражение, если оно присутствует. На зерне в игру вступает добавляемое измерение глубины и контаминанты становятся более неуловимыми, часто ускользающими от распознания даже внимательным и проницательным глазом. Не будучи замеченными, контаминанты получают возможность распространится, когда данной грибницей будет инокулировано новое стерильное зерно.
Перед проведением пересадки примите все предосторожности и убедитесь в стерильности окружающей среды, в которой проводится инокуляция. После чистки комнаты не рискуйте её чистотой, входя в неё в грязной одежде. К сожалению лишь немногие культиваторы принимают во внимание тот факт, что они сами являются главным источником инфекции. На самом деле само человеческое тело суть среда, кишащая бактериями и микроскопическими клещами, усеянная спорами плесеней и семенами растений.
Только убедившись, что соблюдены все условия чистоты, можно приступать к производству грибницы.

Инокуляция стерильного зерна культурой на агаре

Выберите чашку с наиболее интенсивно растущей культурой, чей мицелий покрывает не более 3/4 поверхности агара. Следует избегать культур, которые полностью захватили поверхность чашки Петри, т.к. чаще всего контаминанты проникают в зазор между половинками чашки. Если внешние края заросли мицелием, эти захватчики могут проникнуть незамеченными. Так как периферийный мицелий засорён спорами контаминантов, любое зерно инокулированное им будет испорчено.
Простерилизовав скальпель в пламени горелки вырежьте треугольный ломтик агара покрытый мицелием, так как это описано в технике пересадки с агара на агар. Осторожно, отточенным и быстрым движением перенесите ломтик в ожидающую банку с зерном, как можно меньше держа её открытой. Прокаливая скальпель перед каждой пересадкой, инокулируйте ломтиком мицелия сколько вам угодно банок. Чашки Петри на две трети покрытой мицелием, должно хватить на 6-8 литровых банок с зерном (максимально возможное количество: 10-12 банок). Чем больше пересажено мицелия, тем быстрее колонизация и меньше шансы заражения. С этого момента банки содержат в себе «мастер-культуру» и вы должны сделать всё возможное, чтобы гарантировать высочайший уровень её чистоты.
Авторы рекомендуют использовать технику «двойного ломтика», в которой исходный треугольник разрезается ещё на две части, и будучи насаженными на скальпель переносятся в ожидающую банку со стерильным зерном. Банки инокулированные данным методом зарастают гораздо быстрее, нежели при переносе целого ломтика.
Ослабление крышки банки перед инокуляцией облегчает быструю пересадку. По мере завершения каждого переноса с агара на зерно, закрывайте крышку и переходите к следующей инокуляции. Обработав таким образом всю партию, плотно заверните крышки и тщательно встряхните каждую банку для равномерности распределения ломтиков с мицелием. В ходе тряски ломтики перемещаются через массу крупы оставляя везде фрагменты мицелия прилипающие к зёрнам. Если ломтик прилипнет к стеклу, распределение затруднится и распространение мицелия задержится. Данная проблема указывает на то, что агар был налит в чашки слишком тонким слоем или пересушен. Встряхнув, инкубируйте грибницу в банках при температуре свойственной виду (повторное перетряхивание может потребоваться на 4-й или 5-й день). Чаще всего мицелий должен полностью колонизировать банки за 7-10 дней.

Прим.ред.: Техника показанная на снимках, подходит для работы в стерильном микробиологическом боксе или ламинаре, но совершенно не годится, когда нет такого оборудования. Причины:
1. путь движений с мицелием слишком длинен, обязательно попадут какие-нибудь микроорганизмы.
2. Нет ничего, убивакщего все падакацие споры и микроорганизмы.
Хорошая идея заключается в том, чтобы поставить горящий спиртовый факел, пространство над ним, и до некоторой степени вокруг, стерильно. Горячий воздух поднимается вверх, недавая оседать пыли и микробам. Соответственно банка и чашка Петри (или пробирка в руке) должны быть придвинуты к самому факелу, причем чашка Петри должна быть расположена повыше, на какой-нибудь подставке (жестяной банке).
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Lor7ik

Сообщение Lor7ik »

Через 2-3 дня после инокуляции, (если инокуляция прошла успешно), кусочек агара начнет обрастать пухом мицелия, а в местах соприкосновения с зерном мицелий начнет перебираться на субстрат. Мицелий растет довольно быстро и с каждым днем осваивает все большую поверхность субстрата, перебираясь по зернам и образовывая полностью заросшие участки.
Как только мицелий начал активно распространяться по субстрату, и появились полностью обросшие участки из нескольких зерен, субстрат можно "перетряхнуть". Во время перетряхивания, обросший мицелием участок субстрата разбивается на отдельные зерна, которые, попадая в новые места, образуют сразу несколько новых очагов развития мицелия - это существенно сокращает время освоения мицелием субстрата, и способствует более равномерному его зарастанию.
Но, поскольку большая часть зерна еще не обросла мицелием и риск ее заражения еще слишком велик, перетряхивать субстрат следует очень аккуратно. При перетряхивании, нужно следить за тем, чтобы зерно как можно меньше касалось крышки банки и самого тампона. В этих местах могут находиться посторонние микроорганизмы, пробравшиеся "из вне", которые могут привести к заражению субстрата. Следует не "трясти" банку из стороны в сторону, а удерживая её в одной руке, другой рукой наносить удары по нижней части банки. Таким образом, субстрат будет перемешиваться внизу банки, почти не попадая в ее верхнюю часть. Сразу после перетряхивания субстрата, зёрна обросшие мицелием теряют свою "пушистость" и их практически невозможно отыскать в общей массе.
Но уже через 1-2 дня на некоторых зёрнах, становятся видны белые точки мицелия, которые быстро увеличиваются в размере и, перебираясь на соседние зерна, завоевывают новые территории. Через несколько дней, мицелий разрастается по субстрату и снова образовывает полностью заросшие участки. Когда это произошло, перетряхивание субстрата следует повторить. С каждым новым перетряхиванием субстрата, очагов развития мицелия становиться все больше. И зарастание происходит все быстрее. Для полного обрастания субстрата мицелием, обычно требуется 3-5 недель, в зависимости от температуры окружающего воздуха. Чем меньше остается неосвоенного мицелием субстрата, тем меньше риск его заражения при перетряхивании. Но все равно, перетряхивать субстрат следует как можно аккуратней, т.к. если заражение все-таки произойдет, субстрат придется выбросить, а банку придется заново стерилизовать. И будет очень обидно, если это случиться уже в самом конце колонизации субстрата.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Lor7ik

Сообщение Lor7ik »

Если заражение субстрата все же произошло, субстрат из этой банки необходимо выбросить. Некоторые виды плесени содержат токсины и могут быть очень опасны для здоровья человека. Поэтому зараженный субстрат проще выкинуть и приготовить все заново.
Нормальный цвет мицелия - белый, допускаются лишь белый цвет с легким голубоватым или желтоватым оттенком. Нормальный запах мицелия - грибной, но запах мицелия практически не чувствуется, его можно почувствовать либо сразу после перетряхивания субстрата (уже на завершающей стадии, когда почти все зерно обросло мицелием), либо при перекладывании субстрата из банки в контейнер. Все другие цвета и запахи - признак заражения субстрата. На снимке справа показано как выглядит полностью обросшее мицелием зерно.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Lor7ik

Сообщение Lor7ik »

Инокуляция зерна мастер-культурой

Будучи полностью колонизированными эти мастер-банки могут быть использованы для дальнейшего производства зерновой грибницы в литровых или 2-х литровых контейнерах. Пересадку мастер-культуры следует произвести в течении нескольких дней после полной колонизации банок, в противном случае могут возникнут трудности с разделением грибницы на отдельные зерна. Ниже приведено пошаговое описание техники пересадки с зерна на зерно:
1. Тщательно исследуйте каждую банку на наличие признаков заражения. Обратите внимание на следующие отклонения: слишком плотное зарастание; участки со слабым или подавленным ростом; зерна покрытые слизью или выглядящие мокрыми (признак бактериального заражения); лопнувшие зерна с мертвенно-бледной, неровной поверхностью; и любые необычные оттенки цвета. В случае возникновения сомнений слегка приподнимите крышку и понюхайте грибницу - кислый запах «гнилого яблока» или же сильный душок обычно являются признаками бактериальной деятельности или заражения плесенью. От банок с таким ароматом следует избавиться. (Иногда банки только частично поражённые бактериями можно использовать для плодоношения, нанеся покровный слой). Никогда НЕ используйте подозрительные банки для последующих инокуляций.
2. Выбрав самые красивые банки с мастер-грибницей, разбейте мицелий ударяя банки о шину или похлопывая ладонью. Грибница должна легко разделиться на отдельные зерна. Встряхните столько мастер-банок сколько вам может потребоваться, учитывая что каждой из них вполне достаточно для инокуляции от десяти до двенадцати литровых или от семи до девяти двухлитровых банок. Перетряхнув, ПОСТАВЬТЕ ЭТИ БАНКИ С ГРИБНИЦЕЙ НА ОТДЕЛЬНУЮ ПОЛКУ И ВЫЖДИТЕ ОТ ДВЕНАДЦАТИ ДО ДВАДЦАТИ ЧЕТЫРЁХ ЧАСОВ ДО ПОСЛЕДУЮЩЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ. Этот период выжидания очень важен, т.к. в некоторых из них грибница не сможет развиваться дальше, обычно по причине бактериального заражения. Если бы эти банки были использованы для дальнейших пересадок, заражение разнеслось бы ещё на десять банок.
3. Повторно проинспектируйте банки на признаки контаминации. После 12 ч или суток мицелий снова покажет признаки роста.
4. Если вы перетряхнули мастер-банки вечером, то наутро уже можно приступать к инокуляции или как только остынут новые банки с зерном (второе поколение, G-2). Опять, вымойте лабораторию, проведите комплекс мер в рамках личной гигиены и наденьте свежевыстиранную рабочую одежду.
Поместите 10 стерилизованных банок с зерном на рабочую поверхность в стерильной комнате. Ослабьте крышки на каждой иэ них так, чтобы они легко снимались одной рукой. Мягко встряхните мастер-банку чтобы зерно рассыпалось и разделилось на отдельные зёрна. Держите банку с мастер-культурой в вашей основной руке, другой рукой удалите ее крышку и откройте крышку первой банки для инокуляции. Покручивая мастер-банку иэ стороны в сторону отсыпьте десятую часть грибницы в первую банку, накройте ее крышкой и переходите ко второй, третьей, четвертой и так пока не проинокулируете всю партию. Закончив с первой партией накрепко заверните все крышки. Заверните крышку и на пустой уже мастер-банке и поставьте её в сторону. По очереди возьмите каждую проинокулированнуто банку и, чередуя потряхивание и вращение, распределите мицелий равномерно по всей банке.
5. Инкубируйте при температуре присущей культивируемому виду. Уже через неделю мицелий должен распространиться на все зерно. Пометив эти банки как G-2, можете использовать их для дальнейших инокуляций, как грибницу для внесения в бедные субстраты или для плодоношения прямо с зерна.
Некоторые виды менее агрессивны, чем другие. У Agaricus brunnescens, к примеру может уйти до двух с половиной недель на колонизацию зерна, в от время как Psilocybe cubensis может управиться за неделю или дней десять. Как раз на этом этапе и может снова пригодиться помощь автопокрышки для перетряхивания субстрата в банках. Расписание перетряхивания для медленнорастущих видов приходится на 5-й и 9-й дни после инокуляции. Банки следует инкубировать в условиях близких к стерильным при температуре наиболее подходящей для культивируемого вида (см. главу XI).
После пересадки мицелия с агара на зерно, можно переходить от этих зерновых культур к получению большего количества банок с грибницей. Серия переносов мицелия начиная с мастер-банок, помеченных как G-1, через ещё два «поколения» банок (G-2 и G-3, соответственно), позволяет добиться экспоненциального наращивания массы мицелия. К примеру, если с агаровой культуры было инокулировано 10 банок (G-1), в дальнейшем с их помощью можно произвести инокуляцию еще 100 банок (G-2), которые в свою очередь дают еще 1000 банок (G-3). Совершенно очевидно, что чистота первой партии банок должна быть безупречной, т.к. в конечном счете, с ее помощью будет проинокулировано еще 1000 банок! Не рекомендуется продолжать инокуляции за пределы третьего поколения. На самом деле если уровень потерь по причине заражений превысит 10%, то второе поколение должно стать последним. Полученные культуры можно использовать для заражения бедных субстратов или непосредственно укладывать в лотки под покровный слой для плодоношения. Перенос с зерна на зерно (G2G) является наиболее эффективным способом производства грибницы. Этот метод предпочитают большинство лабораторий занимающихся культивированием пластинчатых (agaricus) грибов. В свою очередь зерновая грибница второго или третьего поколения продаётся простым фермерам и культиваторам, которые используют ее для оплодотворения своего компоста. Пересадка с зерна на зерно, при производстве большого количества грибницы, по скорости и легкости во много раз превосходит инокуляцию зерна непосредственно с агара. Тем не менее, любой культиватор должен возвращаться к агаровой культуре в целях сохранения и поддержания чистоты штамма.

АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ НОСИТЕЛИ ГРИБНИЦЫ

Некоторые виды грибов на зерне растут не очень хорошо и им больше подойдут альтернативные носители грибницы. Другие грибы не растут на зерне вовсе. К примеру такие обитающие на деревьях грибы как Lentinus edodes и Flammulina velutipes предпочитают опилки и отруби в качестве субстрата. Ещё один вид носителя состоит из отрубей и перлита. Перлит это стекловидный камень разогретый свыше 500°С и взорванный как попкорн. Тонкие хлопья отрубей легко стерилизуются, в то время как перлит создает структуру смеси. Рецепты приготовления следукщие:

ГРИБНИЦА НА ОПИЛКАХ С ОТРУБЯМИ
4 части опилок (твердых пород)
1 часть отрубей (рисовых или пшеничных)
Замочите опилки в воде как минимум на двадцать четыре часа. Дайте стечь воде затем тщательно смешайте с отрубями. Если смесь обладает правильным уровнем влажности, то при сжатии в кулаке выделится только несколько капель воды. Плотно наполните доверху контейнер (с широким горлом) субстратом. Японские производители грибницы делают в субстрате по центру отверстие до дна, которое впоследствии заполняют инокуляционным материалом. Стерилизуйте 60-90 минут при 1,05 атм (15 psi). После остывания инокулируйте агаром, жидкой эмульсией или зерном. Полностью колонизированная емкость с грибницей на опилках с отрубями может быть также использована для дальнейших инокуляций.

ГРИБНИЦА НА ПЕРЛИТЕ
120 миллилитров воды
40 грамм перлита
50 грамм пшеничных отрубей
6 грамм гипса (сульфат кальция)
1,5 грамм карбоната кальция
Просейте перлит чтобы удалить из него пыль и мелкий мусор. Наполните контейнер (с узким горлом) сухими ингредиентами и хорошо смешайте. Добавьте воду и продолжайте перемешивать пока ингредиенты не увлажняться полностью. Стерилизуйте час при 1,05 атм (15 psi), Инокулируйте агаром или жидкой эмульсией.

МЕТОДЫ ИНОКУЛЯЦИИ ЖИДКОСТЬЮ

Способ инокуляции зерна взвесью измельчённого грибного мицелия в стерильной воде обладает высокой эффективностью. Эта насыщенная мицелием смесь содержащая сотни коротких клеточных цепочек впрыскивается в банку со стерильным зерном. По мере того как эта жидкость просачивается через зерно, каждый из равномерно распределённых фрагментов мицелия становится точкой инокуляции. В течении нескольких дней видимые признаки роста могут не появиться или рост будет слабым. На четвертый или пятый день после впрыскивания при сохранении оптимальной температуры станут заметными места активного роста мицелия, В течении буквально часов эти участки увеличатся и вскоре зерно будет поглощено мицелием. Способ жидкой инокуляции позволяет избежать частого перетряхивания банок и использовать одну чашку Петри для инокуляции до 100 банок, а это в десять раз больше, чем получилось бы при использовании обычного способа пересадки агара. Существует несколько способов изготовить взвесь мицелия в воде, два из которых описаны здесь.
Первый способ достаточно прост. Используя стерильный шприц впрысните 30-50 мл стерильной воды в чашку со здоровой культурой. Затем поскребите иглой по поверхности мицелия и втяните в шприц как можно больше его фрагментов. Всего 5 мл полученной жидкости достаточно для инокуляции литровой банки с зерном.
Второй способ включает использование блендера со специальной автоклавируемой насадкой-емкостью для размешивания. (Несколько компаний производят специальные ёмкости из алюминия и нержавеющей стали приспособленные для работы с жидкой культурой - см. Приложение к данной книге), Ее надо наполнить водой на две трети или три четверти, накрыть алюминиевой фольгой, стерилизовать и дать остыть до комнатной температуры.

В асептических условиях поместите в нее плотно поросшую мицелием пластинку агара разрезав ее на четыре дольки или на тонкие полоски. Поскольку большинство контаминантов сосредоточено по внешнему периметру чашки, не рекомендуется использовать эти области. Положите все дольки или полоски в жидкость. Включите блендер на максимальной скорости не более чем на 5 секунд. (Более продолжительное перемешивание приведёт к разрушению не только клеточных цепочек, но и к повреждению самих клеток. Такая взвесь окажется непригодной). Наберите в стерильный шприц 5-10 мл концентрата мицелия и инокулируйте готовую банку с зерном.
Дальнейшее совершенствование этого способа предполагает разведение концентрированной взвеси в соотношении 1:10. Введите по 50 мл концентрата в сосуды содержащие по 450 мл стерильной воды. Для этого хорошо подойдут стеклянные банки с узким горлом объёмом около литра. Мягко встряхните каждую банку для равномерного распределения мицелия. После этого можно инокулировать банки с зерном используя по 10-15 миллилитров раствора на каждую. В результате использования этого метода вы получаете экспоненциальное увеличения объёма инокуляционного материала с помощью воды, которая является носителем который доставит частицы мицелия глубоко в банки наполненные зерном. Это пока единственная технология использующая взвесь мицелия в воде для инокуляции. Нет сомнений что со временем появятся дальнейшие улучшения благодаря микофилам, которые в ходе собственных экспериментов разработают свои технологии.
При использовании металлических крышек для банок в них можно сделать отверстия диаметром 1-2 мм и заклеить их липкой лентой или пластырем. Перед инокуляцией стерильных контейнеров откройте отверстие, введите а него иглу шприца, впрысните в него взвесь и верните пластырь на место. При использования такого способа инокуляции шанс проникновения воздушной инфекции за одну или две секунды в такой маленький зазор минимален.
Метод жидкой инокуляции отлично работает при условии, что исходная культура чиста и свободна от посторонних спор; в противном случае вся партия проинокулированная из этой чашки будет потеряна. Недостаток тут кроется в том, что в воду попадают как нужный мицелий так и споры контаминантов и если бы при традиционном способе инокуляции заражению подверглись бы только несколько банок, то в случае с жидкой инокуляцией до сотни банок с субстратом могут стать непригодными.
Хотя взвесь большинства видов грибов полученная таким способом пригодна для инокуляции, мицелий некоторых грибов не выдерживает перемешивания в блендере.

ИКУБАЦИЯ ГРИБНИЦЫ

С каждым последующим шагом процесса разведения нарастает масса мицелия и соответственно субстрата- Через неделю-две после инокуляции банки с носителем должны быть полностью колонизированы грибным мицелием. Опасность здесь заключается в том, что если инфекция останется незамеченной, то плесень или бактерии будут воспроизведены в больших количествах. Следовательно со временем чистота мастер-банок становится первостепенной. Правильный баланс параметров среды, особенно температуры, создаёт благоприятные условия для развития именно грибного мицелия.
После инокуляции банки следует хранить на полках в комнате с легко регулируемой температурой в практически стерильных условиях. Свет и влажность не столь важны на данном этапе, т.к. закрытые банки удерживают влажность. Циркуляция воздуха важна только в том случае, если банки перегреваются. Опасность перегрева повышается, если все полки комнаты плотно заставить банками. Многие грибки термофилы неактивные при комнатной температуре процветают при температурах для грибов слишком высоких. Основной трудностью при создании инкубатора для большого числа банок является разделение воздуха на слои с различной температурой (стратификация). Чтобы избежать этого следует, если возможно, заблаговременно принять соответствующие меры.
Важнейшим фактором, влиякщим на скорость роста мицелия, является температура. Для каждого вида существует оптимальный уровень температуры, при котором скорость роста максимальна. Как правило, лучшая температура для вегетативного роста на несколько градусов выше оптимальной температуры стимулирукшей плодоношение. В Главе XI наиболее подходящие температурные условия перечислены для более чем дюжины культивируемых грибов. Еще один фактор влиякяции и на скорость роста и на восприимчивость к заражению это процент влажности. Эта тема обсуждалась выше в этой главе.
Банки надо осматривать почти каждый день, выискивая малейшие признаки заражения. Наиболее распространены зелёные плесени Penicillium и Aspergiltus. Ели признаки заражения обнаружены, запечатайте банку и вынесите её из лаборатории и вообще из помещения, где происходит проращивание. Если у вас есть только подозрение на то, что банка заражена, пометьте её для дальнейшего обследования.
Не все изменения цвета мицелия фактически являются заражением. Грибной мицелий выделяет желтоватую жидкость - это продукт его обмена веществ, который собирается капельками вокруг зёрен покрытых мицелием. По мере старения культуры и постепенного переваривания зерна скапливается всё больше отходов жизнедеятельности мицелия. Эти выделения состоят по большей части из спиртов (этанол и ацетон) и со временем появляются кислоты, которые снижают уровень рН субстрата. Эти отходы создают благоприятные условия для размножения бактерий, которые буйно разрастаются в них. Небольшие количества этой жидкости не представляют опасности для культуры; избыточное количество жидких продуктов обмена веществ (когда сам мицелии приобретает желтоватый оттенок) определенно нежелательно. Если жидкости скопится слишком много, то мицелий ослабнет и скорее всего погибнет в собственной экскреции. Такое избыточное «потение» показатель одного или комбинации следующих условий:
1. Температура инкубации слишком высока для данного вида. Учтите что температура внутри банки на несколько градусов выше температуры окружающего её воздуха.
2. Старение культуры; слишком долгий период инкубации.
3. Недостаток воздухообмена способствующий развитию анаэробных бактерий.
Инфицированные банки должны уничтожаться стерилизацией и не храниться дольше недели. Не вскрывайте банки зараженные плесенью, если они не были автоклавированы или источник заражения не был определен как неопасный. Некоторые контаминанты свойственные грибной культуре являются патогенными для человека и могут вызывать разнообразные кожные и респираторные заболевания. (См. Главу XIII о заболеваниях грибной культуры). Автоклавируйте зараженные банки 30 минут при 1,05 атм (15 psi) и затем сразу очищайте их. Во многих автоклавированных банках инфекция появляется снова, если их содержимое не уничтожить в течении нескольких дней.
Если существует исключительно высокий уровень заражения, проверьте все вероятные источники заражения и особенно качество изначальной культуры в мастер-банках (в частности влажность зерна) и общую гигиену непосредственного окружения. Как только культура полностью покроет мицелием зерно и её качество не будет вызывать сомнений полученную грибницу можно будет использовать для инокуляции бедных субстратов или выкладывать в лотки, наносить покровный слой для плодоношения.

Источник Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", май. - 2007

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

ОБ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА
(Night Elf)

Многие из тех, кто выращивал мицелий на пшенице, сталкивались с проблемой закисания зернового субстрата (пшеница), в особенности те, для кого скороварка недоступна. И зачастую не помогает ни просушка зерна перед стерилизацией, ни дробная стерилизация, ни тщательное соблюдение условий стерильности.
Вероятность закисания можно значительно снизить, если перед отвариванием зерна добавить в воду, в которой зерно будет вариться, раствор перекиси водорода. Метод успешный, проверенный на личном (и не только) опыте.
На литр зерна берется 100-150 мл 3%-ной перекиси водорода (продается в аптеках). Стоит заметить, что выгоднее приобрести в магазине химреактивов 35%-ную, которая стоит около 1$ за литр, и просто разбавлять по мере надобности до нужной концентрации.
Перед добавлением перекиси обязательно зерно тщательно промыть. Иначе эффект обеззараживания может существенно снизиться или сойти на нет из-за массы загрязнений, присутствующих в зерне.

От количества воды, в которой будет вариться зерно, также зависит концентрация раствора, а следовательно, эффективность метода. Поэтому воды лучше не переливать. Достаточно налить воды столько, сколько необходимо для отваривания и не более (чтоб покрывала зерно примерно сантиметра на 2-3) . Залив зерно, дать ему постоять минут 10. Затем, постепенно нагревая (при нагревании перекись водорода разлагается), довести до кипения. При этом жидкость будет заметно пениться.

ВЫРАЩИВАНИЕ МИЦЕЛИЯ В ЖИДКОЙ СРЕДЕ
(Аберт)

В любой аптеке покупаем любое лекарство для капельницы. Лекарство продается в 400 мл. и 200 мл. стеклянных бутылочках с резиновой пробкой. Так выглядит эта бутылочка:
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Далее, выламываем предохранительный, алюминиевый кружок, находящейся на самом верху пробки, но НЕ удаляем алюминиевый ободок, который удерживает саму пробку.
Должно получиться вот так:
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Затем с помощью двух иголок и одного шприца (желательно большого объема), выкачиваем содержимое бутылочки. Пользоваться удобнее именно двумя иголками, и не высасывать жидкость из бутылочки, а наоборот, Заполнять бутылочку воздухом. В результате избыточного давления, жидкость полностью удаляется из бутылочки в течении нескольких минут.

Естественно, чтобы жидкость вытекала, бутылку нужно перевернуть вверх ногами.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

После того, как вся жидкость удалена из бутылки. Закачиваем в бутылку, примерно 100 мл. чистой воды и энергично трясем. Это делается для того, чтобы промыть бутылочку и окончательно избавиться от остатков лекарства. Проделать эту процедуру лучше 2-3 раза.
Теперь мы готовим питательный раствор. Раствор можно приготовить и из меда, но, на мой взгляд, удобнее использовать фруктозу. Во-первых, проще контролировать концентрацию раствора, отмеряя нужное кол-во вещества, во-вторых, раствор абсолютно не имеет цвета, (что облегчает обнаружение мицелия :) ), к тому же, фруктоза продается везде и по своему составу, она совершенно одинаковая, а также, фруктоза может храниться довольно длительный промежуток времени, без видимых изменений.

Для приготовления раствора необходимо полностью растворить фруктозу в воде. Рекомендуемая концентрация 2 грамма фруктозы, на 100 мл. воды. Повышенные концентрации фруктозы в растворе, приводят к образованию более «жидкого» мицелия, то есть при приготовлении 4 % раствора фруктозы, мицелий, даже через длительный промежуток времени, будет легко Засасываться в шприц через иглу. А при пониженных концентрациях, например, при приготовлении 1 % раствора фруктозы, мицелий, через некоторое время, будет образовывать довольно плотные сгустки, которые очень трудно втягиваются через иглу, но зато в таком виде, мицелий дольше хранится.
Раствора, следует приготовить около 300 мл. (если используется бутылка емкостью 400 мл.). Если используется бутылка меньшего объема, то раствора следует приготовить примерно на 2/3 от объема бутылки. Не следует заполнять бутылочку раствором «под завязку», так как при дальнейшей стерилизации, в результате нагревания, алюминиевый ободок который удерживает пробку, может не выдержать. Далее, закачиваем раствор в бутылочку. Для этого также, лучше использовать две иглы и один шприц. Вторая игла, позволит воздуху выходить из бутылки, не образовывая избыточного давления. После того, как мы залили раствор в бутылку, ее следует простерилизовать.
Стерилизовать бутылочку, можно как в кастрюле, так и в скороварке. Единственное условие, стерилизацию следует проводить, не более 30 мнут, иначе может произойти карамелизация фруктозы, и на ней ничего не вырастет.

После стерилизации, даем бутылочке остыть, до комнатной температуры. И только после полного остывания, производим инокуляцию споровой взвесью. Затем помещаем бутылочку в теплое (~ 25°С), темное место и ждем результатов. По прошествии 24-48 часов, обычно начинается бурное разрастание мицелия. Но в некоторых случаях, первые признаки разрастания мицелия проявляются лишь на 5-
7 день. В любом случае, неделя - контрольный срок, если за это время ничего не произошло, и раствор по-прежнему, абсолютно прозрачный, стоит все переделать заново.
Главное отличие этого метода в том, что благодаря использованию герметично закрытой бутылки, вероятность заражения питательного раствора посторонними микроорганизмами сводится к нулю.
Хранить мицелий, выращенный таким способом, следует в холодильнике. Для длительного хранения этот метод не подходит. Максимальный, гарантированный срок хранения: 2 месяца.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

ВЫРАЩИВАНИЕ ГРИБОВ(вешенки) НА ДРЕВЕСНЫХ ОПИЛКАХ
(Night Elf)

В данном руководстве описано культивирование мицелия в нестерильных условиях.

О преимуществах данного метода:
1. Будучи достаточно бедным субстратом, древесные опилки менее подвержены заражению конкурентной микрофлорой, чем богатые питательными веществами зерновые субстраты. Так же древесные опилки можно успешно использовать в нестерильных технологиях выращивания грибов.
2. Удобны в использовании, так как в отличии от сена и соломы не требуют дополнительного измельчения.

Недостатки:
Меньшая, в сравнении с зерновыми субстратами, урожайность.

Выбор сырья:
Следует использовать в качестве субстрата опилки древесины лиственных пород. Таких как тополь, ольха, береза, осина, липа, вяз и др. Добыть данное сырье можно на предприятиях деревообрабатывающей промышленности, лесопилках, и прочих объектах, связанных с обработкой древесины.

Теоретическое отступление
В чем преимущества и какова цель подобных технологий?
Дело в том, что развитие конкурентных плесеней и микроорганизмов зависит от легкодоступных источников азотного и углеродного питания. Обработка субстрата при высокой температуре вызывает гидролиз растительных полисахаридов и появление свободных легкоусвояемых сахаров, которые способствуют размножению конкурентных плесеней и бактерий. Селективный субстрат, тормозящий развитие плесеней и благоприятствующий росту мицелия, получают при обработке умеренной температурой (60-70С). Повышение температуры обработки до 75-85 С приводит к стимуляции развития плесеней типа Gimaniella, Trichoderma, Fusarium, Mucor, если обработка достаточно длительная. Чем сильнее термическая обработка, тем меньшее число организмов выживает, в том числе и полезных, которые обеспечивают селективность субстрата, определяемое химическим составом сырья и активностью полезной микрофлоры. Микроорганизмы, обеспечивающие нормальное развитие мицелия в присутствии конкурентной микрофлоры относятся к группе термофильных бактерий рода Bacillus. Они утилизируют свободные легкоусвояемые сахара и тем самым, мешая развитию конкурентных плесеней и микроорганизмов. Эти полезные микроорганизмы успешно выдерживают температуру до 70 С.

Описание процесса


Опилки завязать в марлю. Положить на дно кастрюли или выварки (или другой посуды, удобной и доступной для вас) металлическую решетку-подставку (в хозяйственных магазинах продают такие специальные подставки под горячие кастрюли и сковородки). Подставка должна быть не слишком низкой и возвышаться над дном кастрюли на несколько сантиметров. На решетку положить завязанные в марлю опилки. Залить водой, чтоб покрыло с верхом. Можно добавить в воду известь в концентрации 1г на литр воды. Держать в нагретом состоянии при температуре 60-68 С около 1-3 часов. Таким образом, наряду с пастеризацией осуществляется увлажнение субстрата. Для равномерности нагрева использовать рассекатель. Потом воду слить до уровня верха подставки (решетки).
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

И подвергать пастеризации при температуре 60-65 С (не допускать чтоб температура превышала 70 С!) в течение 3-10 часов. Для контроля температуры следует использовать термометр (ртутный лабораторный или бытовой). Термометр закрепить на штативе так, чтоб он был погружен в кастрюлю на подходящую для измерений глубину.

Примерно так, как на изображении:
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

После окончания пастеризации огонь выключить. Кастрюлю, плотно прикрытую крышкой, тщательно обернуть полотенцами или любым доступным для вас утепляющим материалом. И оставить для медленного остывания/ферментации. С остывшего субстрата, перед укладыванием его в емкости, позволить стечь лишней влаге (можно слегка отжать прямо в марле).
Субстрат закладывается в емкости (удобно использовать обычные стеклянные литровые банки со стеклянными крышками). Наиболее эффективно и быстро будет развиваться мицелий, если после каждого слоя субстрата добавлять около столовой ложки заранее приготовленного обросшего мицелием зерна. На литровую банку, таким образом, уходит около 4 ложек зерна. Заполнить субстратом банки, но не под самое горлышко, а оставляя воздушную прослойку сантиметров в 5-6 между верхом субстрата и крышкой. Не следует плотно утрамбовывать. Во избежание трудностей с доступом воздуха. Достаточно постукивания по банке ладонью, чтоб субстрат слегка утрамбовался.
Крышка не должна прилегать слишком плотно. (Можно обойтись и без обросшего зерна и инокулировать споровой взвесью. Но в этом случае потребуется время на прорастание спор.)

Банки поставить в недоступное для света место. Буквально на следующий день уже видно разрастание мицелия. А дня через три картина примерно такова:
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Оптимальная температура для зарастания 27-30 С. При такой температуре процесс длится 2 недели. Если температура ниже, или субстрат был инокулирован спорами - времени для полного освоения потребуется больше.
Когда субстрат полностью освоен мицелием и выглядит примерно вот так, можно перекладывать его в контейнеры для плодоношения. Можно сделать покровный грунт (смесь торфа и вермикулита), но практика показала, что в нем нет крайней необходимости. Блоки без покровного грунта равномернее (по времени) и «инициативнее» плодоносили. Да и урожай получался чистый, без частичек земли на шляпках и ножках, что очень удобно для сбора. Но с другой стороны, без покровного грунта субстратные блоки сильнее сохнут.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Контейнеры с субстратом покрыть пищевой пленкой (или фольгой, если контейнеры прозрачные, так как при выставлении на свет плоды начнут формироваться в районе дна и стенок прозрачных контейнеров). Поставить в темное место на несколько дней. За это время потревоженный при перекладывании мицелий срастется и начнет пушиться на поверхности субстратного блока.

На этой стадии контейнеры следует выставить в террариум, или другой доступный вам и приемлемый парник. Освещение может быть как искусственное, так и естественное дневное (главное избегать прямого солнечного). Влажность в пределах 80-90% при температуре 24-27 С. Проветривание - несколько раз в день. Особенно после образования примордии (наступает примерно день на 5-7-й после выставления контейнеров в парник). От недостатка кислорода плодовые тела могут остановиться в росте и погибнуть. Так же внимательно следует наблюдать за влажностью и не позволять ей подниматься выше нормы. Так как повышенная влажность вместе с недостатком кислорода способны полностью загубить урожай.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Снимать грибы нужно в момент перед разрывом вуали, соединяющей шляпку с ножкой гриба. (Если вы хотите сделать споровые отпечатки, то следует дать выбранным экземплярам полностью раскрыться и начать сыпать споры.)
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Собирать урожай лучше при помощи пинцета, ухватив за основание ножки гриба и аккуратно выкручивая. Снимать надо все образовавшиеся на данный момент грибы, так как оставленная мелочь все равно не сможет развиваться после такого механического вмешательства. Так же, во избежание заражений, следует удалить все недоразвившиеся и остановившиеся в росте плодовые тела. Субстратный блок после сбора урожая
следует накрыть пленкой и поставить в темное место на пару дней. Если поверхность слишком сухая - побрызгать водой из пульверизатора. Если блок слишком ссохся - подвергнуть регидрации: залить кипяченой водой комнатной температуры и дать постоять несколько часов. Воду слить. (Для блоков без покрова полная регидрация предпочтительнее опрыскивания, так как они сильнее сохнут.)
Иногда, не желающий плодоносить блок можно подвергнуть «холодному шоку», поставив на несколько часов в холодильник (t 3-6 С) . Таким образом, стимулируется вспышка плодоношения.
Древесные опилки — довольно стойкий субстрат по отношению к конкурентной микрофлоре, так что блоки доживают до 5-и (а иногда и более!) волны плодоношения при самой минимальной заботе о стерильности условий.

ВЫРАЩИВАНИЕ ГРИБОВ НА СУБСТРАТЕ ИЗ СЕНА

(KarrR)
Как полагается в науке, вначале небольшое введение — в чем особенности метода. Весь цикл развития грибов, от споры до плодового тела, происходит в данном случае на сене. Это определяет и основные преимущества метода, и его основные недостатки. Сначала о последних. Сено — относительно бедный субстрат (-) , поэтому выход плодовых тел несколько ниже, чем при использовании риса или другого зерна. По этой же причине развитие грибов на сене происходит чуть медленнее. Разница эта заметна, однако, только при выращивании в масштабах, приближающихся к промышленным, и если вы собираетесь завалить своей продукцией средних размеров мегаполис, то лучше предпочесть наиболее высокотехнологичный метод с богатой средой и абсолютной стерильностью. Однако обеспечить себя и небольшой коллектив единомышленников пищей для духовного развития приведенным ниже методом вполне реально. Преимущества опять же в том, что сено - относительно бедный субстрат (+), поэтому на нем замедляется рост не только мицелия высших грибов, но и плесени, бактерий и т.д.: на сене мицелий получает даже некоторое преимущество перед конкурентами. На зерновой среде случайно попавшие споры плесневых грибов быстро забивают слабый мицелий, на сене же нередко можно видеть, как пятно плесневого заражения постепенно «съедается», зарастая белым пушистым мицелием., (впрочем, есть то, что вырастает из такого мицелия, все-таки лучше не надо). Поэтому этот метод не требует сверхстрогой стерильности и дорогого оборудования для стерилизации. Добыв немного спор, остальное легко раздобыть на любой кухне. Таким образом, домашние грибы становятся доступны не только для лиц с высокой социальной активностью, но и для людей более ленивых, у которых нет денег. И еще один (+) - на сене грибы вырастают в среднем крупнее.

Споры -> рассада.

Отпечаток не обязательно должен быть стерильным. Для посева спор на рассаду хорошо подходят стеклянные баночки с закручивающимися крышками объемом 100-250 мл. из-под майонеза или детского питания - меньше расход спор, быстрее осваивается субстрат; мицелий в каждой баночке генетически уникален, есть возможность для отбора самого лучшего.
В каждой крышке делается гвоздем или шилом одно небольшое отверстие. Баночки на три четверти наполняются сеном (которое на этом этапе лучше измельчить, порезав ножницами - проще будет вынимать), заливаются водой так, чтобы вода закрыла сено сверху, крышки заворачиваются. Банки ставятся на дно простой кастрюли с водой (скороварка не нужна). Лучше подложить под банки тряпочку, чтобы точно не лопнули, но вроде не лопались и так.
Вода в кастрюле - чуть ниже баночных крышек. Накрываем кастрюлю крышкой и кипятим примерно час. Выключаем. Пока банки еще не совсем остыли, сливаем воду из кастрюли, вынимаем баночки прихваткой, переворачиваем кверху дном и даем воде из банок (отвару) стечь через дырочку. После чего отверстие закрываем кусочком ваты, смоченным в спирте, и прикрепляем эту ватку скотчем. Оставляем остывать. Если готов шприц со спорами, можно заражать сразу, как только банки остынут до комнатной температуры, если есть только отпечаток -готовим шприц. Подойдет любой кубов на 5-10. В стеклянный набираем воды и кипятим целиком, лучше с иглой. В одноразовый стерильный набираем кипятка и оставляем остывать; в уже нестерильный набираем раствора хлорки, промываем изнутри, потом набираем кипятка, сливаем, еще раз набираем кипятком и оставляем остывать.
Теперь нужна небольшая емкость, куда смывать споры. Хороши стеклянные чашки Петри с крышками, их можно прокипятить, они же бывают одноразовые стерильные; но подойдет и рюмка, сполоснутая кипятком.

Затем готовим рабочее место с относительной стерильностью. Можно воспользоваться духовкой, или производить все операции вблизи зажженной горелки/спиртовки. Минимально достаточно в помещении без сквозняков опрыскать воздух над рабочим местом и протереть его поверхность слабым раствором хлорки.
В чистую стеклянную емкость (см. выше) смываем споры с отпечатка водой из шприца. Можно перед смыванием соскрести споры концом иглы. Снова втягиваем воду в шприц, уже со смытыми спорами. (Чашки Петри хороши тем, что все это можно делать под приоткрытой крышкой, поэтому в будущем удобно отпечаток сразу делать на простерилизованной/стерильной чашке Петри). Взбалтываем шприц. Сквозь ватку в дырочку вводим иглу шприца, впрыскиваем примерно по кубику в каждую 200-мл. баночку. Убираем баночки в темное, теплое (28 С) место на неделю-две.
Через некоторое время смотрим, что выросло. Мицелий - чисто белый, на сене часто растет характерными красивыми «перьями». Если мицелий вырос, о возне со шприцами можно надолго забыть.

Рассада -> плодовые тела.

Когда мицелий зарастет почти весь объем баночки, рассада готова, и пора готовить посуду покрупнее. Размер ее ограничивается только тем, в чем вы будете эту посуду пастеризовать. Хороши банки из-под венгерских огурцов-помидоров. На этом этапе дырки в крышках не нужны.
Пастеризуем, как на предыдущем этапе, примерно час. Даем чуть-чуть остыть, ослабляем крышку, так, чтобы вода могла стечь, переворачиваем кверху дном. Когда вода сольется, наклоняем банку, чтобы слить воду, оставшуюся в крышке. Остужаем банки до комнатной температуры.
Теперь из баночки с рассадой куски поросшего мицелием сена можно просто перенести чистым пинцетом в большие банки с сеном. Эту процедуру тоже лучше выполнять в максимально стерильных условиях. Минимум стерильности: протереть спиртом/хлоркой стол и крышки банок, переносить мицелий быстро, как можно меньше приподнимая заранее ослабленные крышки, каждый раз дезинфицировать пинцет хотя бы в стакане с кипятком.
После пересева мицелия важно, чтобы крышки не были Закручены слишком сильно -внутрь должен понемногу поступать воздух. Опять-таки ставим банки в темноту и тепло. Постепенно мицелий зарастает все сено. Можно перекинуть его в новые банки с пастеризованным сеном, можно оставить на урожай, начав выставлять банки на свет.
На этом этапе поверхность можно присыпать землей/компостом/торфом, предварительно простерилизованным (пропаренным). Процедура эта называется в англоязычной литературе «casing», и несколько улучшает результаты, но не настолько, чтобы непременно этим заморачиваться. Грибам достаточно даже неяркого света несколько часов в день, лучше - естественное освещение. Если вы не хотите потом выковыривать грибы со дна, лучше обернуть низ банки фольгой или плотной бумагой.
Когда плодовые тела начинают быстро расти, можно дать им возможность расти за пределы банки, создав микропарничок из обрезанной пластиковой бутылки или пакета, охваченного на горле банки канцелярской резинкой. Если набивать банки сеном не доверху, их вполне можно не открывать вплоть до сбора урожая.
Перебрасывать мицелий, то есть размножать его вегетативно, можно довольно долго, но постепенно он начинает расти все хуже, этот момент хорошо отследить и дать грибам размножиться половым путем - собрать и снова прорастить споры.
Сено годится любое, но лучше всего растет почему-то на осенней, желтой, умершей естественной смертью траве. Помните, что грибы любят накапливать в себе свинец и прочие тяжелые металлы, поэтому сено лучше брать подальше от машин и дорог. Удачи!

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

ТЕХНОЛОГИЯ ПЕРЕНОСА СПОРОВОГО ОТПЕЧАТКА В ШПРИЦ
(Psilocyber)

ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальная эффективность этих инструкций достигается при условии работы в наиболее стерильном окружении из доступных. В идеале стоило бы воспользоваться стерильным и чистым главбоксом (glovebox). Существует много несложных способов конструирования главбоксов; на популярных микологических сайтах можно найти большое количество их схем. Если же ж у вас отсутствует сам главбокс или желание его конструировать, все следующие шаги с успехом могут быть осуществлены с использованием техники "oven tek." Которая состоит в привлечении обычной духовки, как способа снижения количества микроорганизмов. Реализуется она следующим способом. Зажгите огонь. Опустите дверцу. Теперь вы можете использовать ее как рабочую поверхность, или наполовину вытянуть один из лотков и работать на нем. Теория (недоказанная) состоит в том, что тепло, поднимаясь, заставляет летучие микроорганизмы также подниматься вверх, сохраняя таким способом вашу рабочую поверхность от их оседания и уменьшая число заражений.

Материалы:
* Пустые, стерильные шприцы
* Двухлитровая (можно больше) кастрюля
* Одна бутылка 91% изопропилового спирта
* Несколько бумажных салфеток
* Зажигалка или спиртовка
* Рюмка
* Стерильный отпечаток спор

Процедура 1: Приготовление стерильного шприца

1. Наполовину наполните вашу кастрюлю водопроводной или дистиллированной водой (используйте дистиллированную воду, если в водопроводной содержится большое количество минералов или химических добавок).
2. Кипятите воду на большом огне не менее десяти минут, этого должно хватить для стерилизации.
3. Возьмите пустой шприц и наберите в него кипятку. Пусть горячая вода остается в нем на протяжении приблизительно двух минут.
4. Выпрысните горячую воду из шприца в раковину (не назад в кастрюлю).
5. Повторите шаги 3 и 4 еще два раза. После второго раза оставьте горячую воду в шприце.
6. Поместите шприц в прохладное чистое место, лучше в чистом zip-lock пакете.
7. Дайте ему остыть несколько часов, перед тем как переходить к процедуре 2.

Процедура 2: Перемещение спор в шприц

1. Сначала очистите вашу рабочую зону. Для этого протрите все рабочие поверхности слабым раствором побелки и щедро увлажните рабочую зону дезинфикатом наподобие Лизола.
2. Поместите в glovebox или на рабочую поверхность дверцы духовки: рюмку, остывшие шприцы, бутылочку со спиртом, бумажную салфетку, отпечаток спор (все еще в zip-lock пакете) и зажигалку или спиртовку.
3. Помойте руки с антибактериальным мылом перед тем как продолжать.
4. Сложите салфетку треугольником и увлажните ее кончик спиртом.
5. С помощью пропитанной спиртом салфетки протрите внутреннюю поверхность рюмки, основательно стерилизуя, таким образом, поверхность которую вы будете использовать для перемещения. Позвольте рюмке высохнуть, это не должно забрать более нескольких секунд.
6. Снимите колпачок со стерильного шприца и в пламени зажигалки простерелизуйте иглу. Потом протрите ее пропитанной спиртом салфеткой. Далее, пока этого прямо не потребует инструкция, попытайтесь ничего не касаться иглой.
7. ПРИМЕЧАНИЕ: очень важно проделывать все настолько быстро насколько только возможно, чтобы свести на нет возможность того, что зараза попадет в вашу рабочую зону и таким образом испортит ваш шприц.
8. Достаньте отпечаток из упаковки. Разверните его таким образом, чтобы получить доступ к спорам. Легонько соскребите иглой от шприца часть отпечатка в рюмку. Для отпечатка среднего размера обычно хватает 1/5 отпечатка.
9. Теперь у вас в рюмке находится небольшая заметная коллекция спор. Выпрысните из шприца (не более половины) воды в рюмку, осторожно смывая споры.
10. Втяните воду со спорами в шприц. Если нужно выпрысните еще немного воды в рюмку чтобы повторно втянуть взвесь и вобрать все споры.
11. После того как вы втянули взвесь спор в шприц, вода в нем должна приобрести темноватый оттенок, также можно заметить плавающие в воде небольшие скопления спор. Это будет означать, что вы успешно завершили процесс.
12. Стерилизуйте иглу еще раз с помощью пропитанной алкоголем салфетки, наденьте на иглу колпачок и поместите шприц обратно в чистый zip-lock пакет.
13. Взвесь спор в шприце должна отстаиваться на протяжении не менее 12 часов, перед тем как ее можно будет использовать для инокуляции банки. Это очень важный момент, так как перед тем как вводить споры в материал субстрата, они должны пройти процесс регидрации. Невыполнение этого пункта может привести к тому, что споры либо вообще не прорастут, либо будут прорастать очень медленно.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

РУКОВОДСТВО ПО ВЫРАЩИВАНИЮ ГРИБОВ
(zеnыч)
(в сокращении)

Введение

В первый раз вам необходимо точно следовать инструкциям, и удерживаться от желания экспериментировать. Эксперимент без достаточного опыта есть главная причина неудач. Если вы вынуждены экспериментировать по причине отсутствия необходимого, то в первую очередь обратитесь к кому-либо имеющему опыт, чтобы убедится, что вы не совершаете глупости.
Грибовод может избирать или отвергать дополнения по своему разумению. Это ваш выбор, но урожай гарантирован только при условии точного выполнения инструкций.
Последнее замечание. Для завершения цикла выращивания необходим «парник». Вы можете выполнить шаги по прививанию банок и через пару недель сделать парник. Для роста культуры потребуется время, и вы можете соорудить подходящий парник не спеша.

Общий обзор процедуры

Для того чтобы вырастить грибы, примененная основа должна быть засеяна и колонизована грибами. Этот шаг требует стерильности, поскольку основа не содержит консервантов, и на ней могут развиться любые паразитные бактерии и споры. Первый этап происходит в герметичных банках, приготовленных на вашей кухне. Для этого нужна мука из коричневого риса и минеральный наполнитель вермикулит. Основа подготавливается, помещается в банки, запечатывается и стерилизуется нагревом. После того, как банки остынут, они засеваются при помощи шприца со спорами.
После того, как основа засеяна спорами, необходимо дождаться пока она не будет колонизована грибами полностью. С этого момента стерильность уже не так важна, поскольку грибы сами способны бороться с паразитами, и основа может быть извлечена из банки. Обычно этот этап занимает две-три недели. После этого основа помещается в парник, где создается высокая влажность. До тех пор, пока основа полностью не колонизована, никакие усилия не требуются.
Парник необходим для поддержания высокой влажности воздуха (около 90%) и удаления углекислого газа, который производят грибы. В течение недели после помещения в парник на основе начнут расти грибы. Еще через несколько недель вырастет некоторое количество взрослых грибов, готовых к употреблению. Они будут расти на основе до тех пор, пока в ней не иссякнут питательные вещества или влага. Парник требует больше или меньше ухода в зависимости от выбранной конструкции. Полностью автоматизированная конструкция, описанная позже, требует внимания раз в несколько дней, в основном для сбора урожая и добавления воды в увлажнитель.
Вполне может получится, что грибы вырастут быстрее, чем вы будете иметь возможность или намеренье их употребить. Довольно нетрудно высушить их и сохранить на несколько месяцев. Некоторые даже предпочитают сушеные грибы свежим.
Иногда, продолжив цикл, можно получить стерильный отпечаток спор от взрослого гриба, из которого наполняется шприц со спорами для прививки новых банок. Эта процедура требует большой осторожности и стерильности. Конечно, эту операцию можно пропустить путем заказа нового шприца со спорами. Шприца в 10 куб.см. достаточно для прививания порядка 10 банок, что соответствует суммарному урожаю в 40-60 грибов. Каким именно путем получать новые поколения грибов -выбор за вами.

Подготовка и колонизация основы.

Грибы растут на питательной основе. Так же, как домашние цветы растут в горшках с землей, грибы можно вырастить на "пирожке" из питательной основы (далее - «субстрата»). Разница в том, что для успеха дела основа должна быть свободна от паразитных бактерий и спор. Любая попытка потревожить основу неизбежно приведет к нарушению процесса.
Необходимые материалы:
Герметичные банки 1/2 пинты (200-250гр)
Вермикулит
Мука из коричневого риса (только из магазина здорового питания — БЕЗ консервантов)
Большая кастрюля с крышкой
Мерная чашка
Миска для замеса
Молоток и маленький гвоздь
Алюминиевая фольга
Дистиллированная вода
Шприц со спорами

Рисовую муку можно приготовить самостоятельно, перемолов коричневый рис в кофемолке. При этом вы должны быть уверенны в отсутствии в нем обычных противогрибковых добавок.

Шаг 1: Подготовка банок

Банки должны иметь герметически закручиваемую металлическую крышку.
Горло банки должно быть не уже ее самой. Это необходимо для легкости извлечения полностью колонизованного «пирожка» из нее.
Подготовьте крышки банок, поскольку они должны быть на банках в момент прививки. Во-первых, это необходимо - потому, что в нестерильной атмосфере надо избегать контакта с воздухом, в котором могут находиться бактерии, во-вторых, из-за того, что банка без отверстий может взорваться при нагревании во время стерилизации. Возьмите маленький гвоздь, и при помощи молотка пробейте 4 отверстия на каждой крышке.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Шаг 2: Приготовление основы

Решите, сколько банок вы будете использовать. В средний парник помещается 6 «пирожков», но некоторые банки могут подвергнутся инфекции, а некоторые могут быть колонизованы раньше других. Рис и вермикулит достаточно недороги чтобы сделать несколько банок.
Для каждой 200гр банки смешайте 2/3 чашки вермикулита и 1/4 чашки муки коричневого риса в миске для замеса. Когда они хорошо перемешаются, добавьте 1/4 чашки воды на каждую банку. Хорошо перемешайте. Эта смесь является основой, которой грибы будут питаться.
Возможный вариант основы: мелконарезанная (прим.1 см) солома, предварительно вываренная в течение часа в марлевом мешке.

Возможный вариант основы: 1 часть перемолотых ржаных зерен, замешанная на двух частях дистиллированной вольт. Разумеется, вы должны быть уверены, что зерна не содержат консервантов.

Шаг 3: Наполнение банки субстратом (питательной основой).


Предлагается осторожно поместить основу в банки. Лучше распределить ее как можно свободней и воздушнеи. В этом случае колонизация пройдет быстрей. А чем быстрее основа будет колонизована, тем меньше риск развития посторонней инфекции. Заполните каждую банку до уровня в 1-2см от крышки, если субстрата не хватило, замесите еще. Основы должно быть достаточно, чтобы игла шприца свободно доставала до нее.
Верхняя часть стекла банки (1-2 см от субстрата до крышки) должна быть чистой, поэтому тщательно удалите с нее все остатки субстрата при помощи бумажной салфетки.

Шаг 4: Запечатка банки (метод "Ramsey Seal")

Вырежьте из алюминиевой фольги квадрат размером примерно 15x15см. Накройте им банку, и, придерживая края, осторожно промните фольгу так, чтобы получалась вогнутая поверхность, почти касающаяся субстрата. Образовавшиеся на краях банки складки фольги необходимо разгладить против направления вращения крышки при ее закрывании. Заполните вогнутую поверхность фольги вермикулитом, разровняв его чем-либо плоским, и аккуратно затяните крышку. Убедитесь, что при этом края фольги не порвались. Обрежьте торчащие из-под крышки края фольги ножницами. Затем возьмите еще один (или несколько) таких же кусков фольги, и старательно оберните крышку, так, чтобы в ее отверстия не могла попасть вода при стерилизации. Теперь банки готовы к стерилизации.

Шаг 5: Стерилизация банок

Возьмите большую кастрюлю. Положите на ее дно кусок х/б материи, это необходимо для предохранения банок от перегрева в результате прямого контакта с дном кастрюли. Поставьте на материю подготовленные банки. Залейте воду так, чтобы она закрывала от 1/2 до 2/3 высоты банки. При этом банки не должны плавать. Поставьте кастрюлю на огонь, дождитесь закипания, закройте крышку, и кипятите банки на слабом огне в течении 1 часа.
Возможный вариант: если у вас имеется глубокая скороварка, то лучше использовать ее, поставив давление на 15 p.s.i. и продержав 20-30 минут.
После этого дайте кастрюле медленно остыть до комнатной температуры. Не открывайте ее крышку, поскольку при охлаждении банок воздух в них сжимается, и есть вероятность проникновения воздуха снаружи, а воздух внутри кастрюли менее опасен, чем в помещении. Остывать банки должны, по крайней мере, несколько часов, неплохо оставить кастрюлю остывать на всю ночь. Споры довольно чувствительны к перегреву, и могут погибнуть при засеве на недостаточно остывшую основу. Не пытайтесь форсировать охлаждение, помните, что даже если банка холодна на ощупь, субстрат внутри нее может быть еще горячий.

Шаг 6: Засев банок спорами

Предполагается, что у вас есть стерильный шприц, содержащий взвесь со спорами, и вы намерены начать первую фазу цикла выращивания. Игла шприца должна быть стерильна. Если ваши пальцы, или что-либо кроме крышки или содержимого банок контактировало с ней, ее уже нельзя считать стерильной. Если вы не уверены в ее стерильности, возьмите зажигалку и прогрейте ее до красна, после чего дайте несколько минут остыть и слегка спрысните содержимое.
Встряхните шприц для того, чтобы споры равномерно размешались.
Удалите фольгу с банок. Вставьте иглу в отверстия, насколько позволяет ее длина, при этом прислонив конец иглы к стенке банки.
Впрысните около 1/4 куб.см. взвеси в каждое из четырех мест, то есть всего 1 куб.см. на каждую банку. Таким образом, одного шприца вполне хватает на несколько банок.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Шаг 7: Выращивание мицелия

Поместите банки в темное место и ждите.
Оптимальная температура 21 С - 30 С. Не превышайте температуры 34 С.
Мицелий (начальная фаза развития грибов) проявит себя как небольшие скопления белой плесени в областях засева.
Со временем мицелий будет, постепенно, распространятся по банке. Осматривайте банку на предмет заражения паразитной плесенью и бактериями. Если вы обнаружили посторонние цвета, процесс придется прервать, основу выкинуть, а банку тщательно вымыть. Не пытайтесь употреблять мицелий из зараженной банки, это очень опасно, поскольку мицелий втягивает и питательные и ядовитые вещества из всего субстрата.
Единственное исключение - мицелий может иногда принимать бледно-бледно-желтый оттенок, если капли взвеси попали на поверхность стекла. Но эти области очень редко подвержены инфекции, заражение обычно происходит в областях, не захваченных мицелием.
Вышеприведенные иллюстрации показывают типичный темп цикла колонизации. Если вы используете старые споры, или температура не оптимальна, или вы недостаточно хорошо перемешали субстрат, вам стоит прибавить к этому еще недельку.
Субстрат нельзя вынимать из банки, пока он не покроется мицелием полностью, что должно произойти примерно через 3 недели. Только после этого субстрат с мицелием можно помещать в парник.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Шаг 8: Создание парника

Главной задачей парника является поддержание относительной влажности воздуха на уровне 90—95%. При этом конденсирующаяся на стенках и потолке влага не должна капать на субстрат. К тому же парник должен вентилироваться для удаления углекислого газа, выделяемого грибами.

«Парник бедняка»

Эта простейшая конструкция, не требующая дополнительного увлажнения, изготовляется из 2-х литровой бутылки из-под прохладительных напитков. Бутылка разрезается на три части, и средняя часть удаляется, таким образом, что образовавшаяся «крышка» плотно прилегает к «дну».
На дно, под субстрат, могут быть помещены мокрые бумажные салфетки для увеличения влажности. Два раза в сутки парник необходимо открывать и слегка проветривать. В такой парник помещается всего один «пирожок» субстрата, и он требует постоянного ухода.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

«Контейнер»

Для одновременного выращивания нескольких «пирожков» субстрата целесообразно соорудить конструкцию, в основе которой можно использовать много разных предметов, к примеру, пластиковые емкости для хранения продуктов, небольшие аквариумы и т.п.

Контейнер должен быть не менее 15-20 см в высоту, и предоставлять минимум 2,5 см пространства вокруг каждого «пирожка». Но помните, что если контейнер слишком высокий или слишком большой, то в нем трудно будет поддерживать достаточную влажность. Дно контейнера должно выдерживать присутствие воды, а крышка должна прилегать герметично. Если контейнер непрозрачен, то необходимо вырезать в крышке крупное отверстие, и герметично закрыть его прозрачным материалом, например, заклеить оргстеклом.
Если в конструкции применяется принудительное увлажнение, то в нее неплохо добавить экран, спасающий грибы от попадания на них образующейся на потолке влаги. Эту роль может выполнить кусок оргстекла (или стекла) размером чуть меньше крышки и закрепленный под углом 30—45 градусов под крышкой. Образующаяся на нем влага будет свободно стекать на его край, и капать только вдоль стенки контейнера. Также необходимо будет избавить субстрат от контакта с дном, на котором может скапливаться вода, для этого на дно надо поставить проволочную сетку (на высоте 1-2 см от дна) . Для удаления лишней воды можно просверлить в дне отверстие размером 2—3 мм.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Шаг 9: Из банки - в парник ?

После того, как субстрат полностью колонизирован, мицелий способен самостоятельно противодействовать развитию любой инфекции на нем. Это, однако, не снимает необходимости соблюдения чистоты и аккуратности при обращении с субстратом и парником. Прикосновения к субстрату желательно все же исключить.
Вы можете снять крышку, перевернуть банку, и субстрат вывалится из нее как детский песочный куличик, в крайнем случае потребуется слегка постучать по банке. Помещая субстрат в парник, проследите, чтобы ориентация «пирожка» не менялась, то есть, верх «пирожка» в парнике должен совпадать с его верхом, в банке, в противном случае часть грибов может пытаться расти вниз, что серьезно осложнит их рост.
Примерно через неделю после помещения субстрата в парник должна произойти первая вспышка плодоношения, и эти вспышки могут повторятся 1-3 раза с промежутками в 2—5 дней в течении цикла.
Взрослый гриб вырастает примерно за неделю. Каждая банка плодоносит в течение 40-60 дней.
Один «пирожок» субстрата способен дать 4—6 среднего размера грибов, примерно около 1 штуки в неделю в среднем. Следовательно, из одного шприца в 10 куб.см можно вырастить 40-60 грибов.
Условия роста грибов определяются конкретным видом.
Грибам также необходим несильный рассеянный свет (желательно с синей составляющей) для провоцирования плодоношения. Этому помогает еще кратковременное снижение температуры, а так же более прохладный режим в парнике по сравнению с банкой.

Шаг 10: Сбор урожая и хранение.

Не стоит пытаться вырастить гриб как можно большего размера, поскольку, во-первых, он при этом вытягивает питательные вещества из субстрата, а во вторых, при этом у грибов здорово портится вкус.
Оптимальный момент сбора - когда пленка, соединяющая низ шляпки и ножку начала разрываться.
Срывать грибы следует осторожно, слегка ухватив за ножку и повернув вокруг оси. Делать это лучше пинцетом.
Грибы можно сушить на открытом воздухе (обязательно без нагрева и прямых солнечных лучей), или в холодильнике, в герметичном контейнере, положив на слой сухого риса (лучше через салфетку).

Источник: Домашняя лаборатория, июль, 2007.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Наиболее характерные заражения грибной культуры, мицелия, субстрата.

Большинство специально выращиваемых грибов растет на стерилизованных субстратах, и если контаминант обосновывается на таком субстрате, он бурно разрастается в отсутствии конкуренции от других контаминантов. В природе, сложные взаимодействия между сотнями других грибов, бактериями, нематодами и т.п. обеспечивают экологическое равновесие. На стерилизованном же субстрате, миколог создает идеальные условия для процветания различной патогенной флоры и фауны. На кейках , заражение обычно вызывается другими патогенными грибами живущими за счет отходов жизнедеятельности культивируемых грибов, иногда - питаясь тем, что не успели съесть культивируемые грибы, а иногда - поселяясь на самих плодовых телах и мицелии. Единственный соперник в борьбе за питательную среду в данном случае - это, собственно, культивируемые грибы.

Слизь, Закисание, Протухание - Bacillus sp.

В банках с зерном (зерновом субстрате - пшенице, рисе и т.п.) данная проблема вызывается Bacillus, которые иногда выживают при стерилизации, образуя эндоспоры, которые весьма устойчивы к нагреванию. От матово-серой до коричневатой , образующаяся слизь характеризуется сильным неприятным запахом, который обычно описывают как запах протухшего зерна, грязных носков или подгоревшего мяса. Bacillus делает не колонизированное мицелием зерно чрезмерно влажным - отсюда и народное название этого недуга - "слизь". Каждое зернышко субстрата как бы обведено вокруг слоем бледно-серого или белого цвета - верный признак заражения этим контаминантом. На этой фотографии хорошо виден белый ободок вокруг зерен.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Bacillus в основном размножаются путем простейшего деления клеток. В неблагоприятных условиях , особенно при повышенной температуре, в каждой родительской клетке формируется значительно более усиленная спора - эндоспора, которая может выживать при высокой температуре значительно дольше , чем родительская клетка. Наиболее практичный метод для избавления от эндоспор предполагает замачивание зерна при комнатной температуре на 12 - 24 часа перед стерилизацией. Все жизнеспособные эндоспоры прорастают за этот период времени и становятся уязвимыми для стандартных стерилизационных процедур. Новые эндоспоры не сформируются во влажной среде покоящейся банки с зерном.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
administrator
Site Admin
Сообщения: 46
Зарегистрирован: Ср дек 20, 2006 10:35
Контактная информация:

Сообщение administrator »

Бактериальные "снежинки" - Pseudomonas tolaasii (P. fluorescens)

На плодовых телах формируются области поражений - цветом от желтых до коричневых. Обычно области образуются на верхушке шляпки гриба, или в непосредственной близости от верхушки. "Снежинки" появляются , когда грибы стоят обильно увлаженные по 4-6 часов после увлажнения террариума. Бактерия распространяется воздушным путем - с пылью. Бороться с этим контаминантом можно уменьшением влажности и опрыскиванием гипохлоридом кальция, в концентрации 150ррт (гипохлорид натрия может обжечь шляпки грибов). Однако, если шляпки так и останутся влажными - обработка гипохлоридом особого эффекта иметь не будет , потому что бактерии будут размножаться со скоростью, сводящей на нет действие этого оксиданта. Шляпки Шиитаке подвержены заражению , вызываемому Pseudomonas gladioli (Burkholderia gladioli).
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Ответить

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 18 гостей